用基因表达谱芯片筛选老年性痴呆基因表达谱.pdfVIP

实验研究 用基因表达谱芯片筛选老年性痴呆基因表达谱 樊小农，温廷益，杜元灏，韩景献，李平，王舒。刘庆忠，石学敏 (天津中医药大学第一附属医院，天津300193) 关键词：老年性痴呆(AD)；快速老化模型小鼠(SAM)；基因表达谱；基因芯片 老年性痴呆(AD)越来越引起人们的重视。不仅化度分数为3．98。实验同时选取正常老化SAMRl 是因为它从早期的记忆力下降，到后期的记忆力完 为对照组，它的平均寿命为568d，8月龄的老化度 全丧失、生活不能自理等严重的智能损害症状，更 分数为2．63。 是因为在老龄社会到来之际。该病严重挑战人类的 选用SAMP810月龄为研究对象。分为2组： SAMP8 生存尊严。现在已经明确AD主要3大病理特征是： 10月龄与正常老化的SAMRl10月龄对照 脑组织细胞外以B淀粉样蛋白(A13)沉积为中心的 10月龄与同品系未发病年轻 老年斑(SP)、细胞内以Tau蛋白过度磷酸化形成的常表达基因：SAMP8 时的SAMP8 神经纤维缠结(Nrr)和神经元的消失。但是由于它 2月龄对照(SAMP8：10月龄～2月龄)， 是多基冈协同(拮抗)作用的生命过程，围绕以上病 以筛选与衰老相关的异常表达基因。 理特征涉及淀粉样前体蛋白(APP)的剪切、水解、清1．2组织制备实验动物被断头处死，去小脑及延 除；蛋白质磷酸化动态平衡系统的失衡：以及神经 髓，大脑被迅速放于液氮中，后储存于一80℃。 细胞凋亡、DNA转录、蛋白质合成、信号转导等不同 水平和环节的众多相关基因的研究。确切病因和病 mRNAMidi 组织总RNA[1I。用OliogotexKit(Quagen 理机制尚不清楚。而基因表达谱芯片能够同时检测 不同组织或细胞、不同发育阶段整个基因组范围内 dUTP标记实验脑组 记cDNA探针并纯化。用Cy3 众多相关基冈在mRNA水平的表达，因此非常适用 dUTP标记对照脑组织mRNA。 织mRNA，用Cy5 乙醇沉淀后溶解在20 于对AD这样病理机制复杂疾病的研究。相对于模 ILL 拟单一AD病理或症状的实验动物模型．本院从日 液中。 本引进的快速老化模型小自鼠(SAM)具有自然老1,4杂交及洗涤将基因芯片(上海博星基因芯片有 化、学习记忆能力下降、痴呆等特点。被认为是目前 限公司)和杂交探针分别在95℃水浴中变性5min， 较好的AD替代研究模型。 将探针加在基因芯片上，用盖玻片封片，置于60℃ 本研究利用含有众多基因种类的15400点小 杂交15～17h，然后揭开盖玻片，分别用2xSSC+0．2％ 鼠基因表达谱芯片，对AD替代研究模型SAM．筛 min， 选AD异常表达基因，探讨其在AD病理机制中的室温晾干。 15检测与分析用General 作用。 Scanning公司的Sca 1材料与方法 4 nAlray 1．1实验分组本研究采用快速老化的S