水貂细小病毒检测技术探究进展.pdfVIP

后补论文 水貂细小病毒检测技术研究进展 2 1,3 1 卢悦 ，王贵升 ，田夫林 （1. 山东省动物疫病预防与控制中心，济南，250022 ；2. 山东农业大学动物医学院，山东泰安 271018 ；3. 山东大 学生命科学学院，济南，250100 ） 摘 要 水貂病毒性肠炎是由水貂细小病毒（MEV ）引起的一种急性、剧烈和高度接触性传染病，其特征性病理变化 是胃肠粘膜出现黏液，有出血性或坏死性炎症变化，主要临床症状是剧烈下痢。该病广泛存在于世界各国，是威胁水 貂养殖的最大疾病之一，给养貂业带来了巨大的经济损失。近年来，国内外研究人员对水貂细小病毒的检测方法进行 了多方面的研究和探索，但仍需要进一步的完善和发展。本文主要对水貂细小病毒现有检测技术的研究进展进行了系 统的阐述，旨在为更好预防和控制该病提供借鉴和帮助。 关键词 水貂细小病毒；检测技术；研究进展 水貂病毒性肠炎是由水貂细小病毒（Mink Enteritis Virus, MEV ）引起的一种水貂急性、高度接 触性传染病，1949 年加拿大最早报道此病[1] 。1967 年Johnson 等在病貂脏器细胞培养物中分离到ME V[2] [3] 。1981 年，姜廷秀等 首先报道了我国发生水貂细小病毒病例，此后该病逐渐扩散到全国各地。 该病在自然条件下发病率较高，不同品种和年龄的貂均易感，尤其以幼貂的感染性最强，但死亡率因 貂的品种和流行情况而异。1996 年，吴威等通过应用抗水貂细小病毒单克隆抗体对我国分离的MEV 进行系统分型，发现我国MEV 流行型主要为B 型[4] 。近年来，随着我国毛皮动物养殖业的不断发展， 动物的健康也受到各种传染病的直接影响，也给养貂业带来了巨大的经济损失[5-6] 。为了保证养殖户 的经济利益、明确传染病的病因、提出预防和治疗的方法，有必要深入研究现有的检测技术，进而改 进现有检测技术和开发新的检测技术。 1 病原学检测 1.1 分离培养 病料采集：感染MEV 的急性病例的血液、脾、小肠和胸腺等脏器以及粪便均可作为分离病毒的 病料。 病料处理：取水貂粪便样品与生理盐水 1:10 比例混匀，3000rpm 离心20min ，取上清，经0.45μ m 微孔滤膜过滤后备用[7] 。 病毒分离：常规方法消化胎猫肾细胞(F81)，按1:10 比例同步接种，37℃培养24h 后，更换培养 液，继续培养，逐日观察细胞病变；如无细胞病变，则继续培养4-5 天后收获，并连续传代培养，至 第4 代仍无病变可认定为阴性。若出现细胞病变，则将培养物于-20℃，反复冻融3 次后，收毒，冷冻 保存备用。 病毒分离鉴定是实验室分离病毒常用的方法，但该方法耗费的时间较长，常常遇到细胞病变不出 现或者出现不明显的情况。 1.2 包涵体检查 取病貂十二指肠制成切片, 经HE 染色、镜检，观察上皮细胞的胞核内有无圆形或椭圆形、边缘 整齐、界线清晰的嗜伊红包涵体[8] 。典型的核内包涵体具有诊断意义，但对于病程超过3-4 天以上的 病例，包涵体常常消失。闫喜军[7]等认为水貂对水貂肠炎细小病毒和水貂阿留申细小病毒均易感染， 且在电子显微镜下两种病毒包涵体较难区别，故仅使用该方法不能作为确诊依据。 1.3 电镜与免疫电镜技术 采集典型病例带有脱落肠黏膜的粪便，经离心处理后，取上清直接制成复染色标本，进行免疫电 镜观察；或者适当稀释病料，3000rpm 离心20 min ，吸取上清液，加入等量氯仿，充分振荡混匀，3 000 rpm 离心20 min 后，取上清直接负染后电镜检查；也可将待检病料离心后，加入等量适当倍数 稀释的标准抗MEV 血清感作后，在免疫电镜下观察查有无细小病毒颗粒。 MEV 病毒粒子为球形质点，直径为20-24 nm ，除完整质点外，还有顶部空的质点[9] [10] 。谭斌 等 从临床疑似