枸杞DNA 的提取方法研究.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2009，37(35)：17380—17381 责任编辑 张杨林 责任校对 卢瑶 枸杞 DNA的提取方法研究 樊云芳，李彦龙，曹有龙 (宁夏农林科学院枸杞工程技术研究中心，宁夏银川75o0o2) 摘要 [目的]寻求高质量枸杞 DNA的有效提取方法，为开展我国枸杞种质资源准确的分子鉴定评价提供试验基础。[方法]针对枸杞 组织中多糖严重干扰基 因组DNA提取质量的问题 ，比较了常规十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法的处理效果。[结果] 常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质，溶液极黏稠 ，致使移液枪吸取 困难，取量不准；改良CTAB法提取DNA产率高，无明显降 解，杂质少，优)瑚 ／OD： 比值在 1．80左右 ，表明DNA纯度高，污染少。通过基 因组DNA—AFLP指纹图谱分析 ，改良CTAB法完全 满足试验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了分析讨论。[结论]为枸杞DNA的有效提取提供 了方法依据。 关键词 枸杞；DNA提取 ；改 良CTAB法 中图分类号 s567．19 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2009)35—17380—02 ResearchontheExtractionMethodofHighQuafityDNAfron ChineseWoIfberry FANYun-fangetal (CenterofChineseWolfberryEngineeringandTechnology，NingxiaAcademyofAgricuhureandForestryScience， Yinchuan．Ningxia750002) Abstract O『bjectiveIrhebasisofthemolecularidentificationandevaluationofChinesewolfberry(Lycium Linn)resourceinChinawas providedthroughtheresearchonthegood—qualityDNAextractedfromit．[Method]Inordertosolvetheproblemofpolyhexoseinterferingthe genomicDNAextractedfromLyciumLinn．，2methods，theconventionalCTABandimprovedCTAB．werecompared． R『esuhs] eresults showedthat wasdifficultytocompletelyremovethecomponentofpolyhexoseinthemethodofconventionalCTABsothattherewasinaccu— rateamountinsolution-takingbecausethepipettedidnotworkwellundertheconditionofverystickyliquid．Thehigh．yieldingDNA extraction couldberealizedinthemethodofmodifiedCTAB．inwhichtherewasnosignificantdegradationandlessimpuritycomponent．Theratioof ∞ 260 ／oD2 wasaround1．80，indicatingthatDNA hadhighpurityandlesspollution．BasedontheanalysisofgenomicDNA—AFLPfin— gerprinting．theimprovedCTABmethodcouldfullymeetthetestrequirements．AswellasakeystepinimprovedCTABmethodwereanalyzed anddiscussed．IConclusionlThebasisoftheeffectivemethodofDNAexrtactedfromChinesewolfberrywasprovided． KeYwords Chinesewoltberry；DNA extraction：ModifiedCTABmethod 枸杞(LyciumLinn．)是一种名贵 的药食同源型植物资 free用前加体积分数为 2％的B一巯基乙醇 ；提取液中CTAB 源，是