急性髓细胞白血病中各特异性物质的表达及临床意义.doc

急性髓细胞白血病中各特异性物质的表达及临床意义 年级：2011级生物技术 姓名：陶廷露 学号：2011222683 摘要：白血病已成人类生命健康的头号杀手之一，对白血病的研究日益重要，而白血病中的特异性物质的表达受到了众多研究者的关注。其中利用 Real-time PCR检测AML患者中COX-2mRNA的表达水平，以此分析COX-2表达水平与AML 临床病理特征和预后的关系；应用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR )测定成人急性白血病及对照组外周血 中 FOX01的含量，并进行比较以此探究FOX01在成人白血病患者及健康人外周血中的表达及临床意义；采用免疫组化法检测A M L患者及非肿瘤患者骨髓骨桥蛋白（OPN）的表达，同时采用ELISA 法检测初治AML、化疗缓解AM L及复发AML患者血清OPN 的水平以此探讨OPN在急性髓系白血病患者中的表达及意义。 关键词：急性髓系白血病；环氧化酶2；转录因子叉头框蛋白；骨桥蛋白； 各特异性物质的表达检测方法 （一）环氧化酶2的表达检测方法及临床意义 方法：环氧化酶(Cyclooxygenase COX )，又称前列腺素过氧化物合成酶，是前列腺素 (PG )合成起始步骤的关键酶【1】目前发现两种COX，即COX -1和COX -2，二者具有不同的结构和生理功能。研究表明，COX-2在多种实体瘤组织中高表达，并且其表达上调与肿瘤的预后相关。采用采用Rea1-time PCR检测COX -2基因在急性髓细胞白血病(AML )中的表达情况，并探讨其与AML预后的关系。 将临床上特定数量的初治AML患者进行分型，用相同的方法治疗2周，取骨髓后进行单个核细胞的总RNA提取，并进行cDNA的合成，采用Real-time PCR检测COX-2 mRNA的表达水平。 AML患者COX -2mRNA RQ的均值为4.77±2.21,以此均值为界值,将AM L患者分为两组：超过半数患者为COX-2高表达组(8.33±1.96 ),患者为低表达组 (1． 89 ±1.04)。 环氧化酶2的临床意义【2】：CO X -2为诱导型，又被称为“快速反应基因”，在正常生理状态下几乎不表达或表达甚少。【3】诱导COX - 2表达的因素存在于细胞内外，多种生长因子或细胞因子(EG F、TG F-B、TG F) 、细菌脂多糖、诱生性一氧化氮合成酶(iNOS)以及癌基因Ras、V-SRC、丝裂原等均可诱导COX -2表达。多项研究证实COX-2在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。首先在一系列癌前病变及癌细胞中发现COX- 2高表达。研究发现B-慢性淋巴细胞白血病中COX-2表达水平上调，体外实验发现COX-2特异性抑制剂NS-398可加速白血病细胞的凋亡。 （二）转录因子叉头框蛋白的表达检测方法及临床意义 方法：人的FOXO1基因定位于13号染色体(13q13—14.1)，编码655个氨基酸。研究证实，FOXO1广泛表达于成人的各组织器官中，包括心、脑、胎盘、 肺、肝。骨骼肌、肾、脾、胸腺、前列腺、睾丸、卵巢、小肠、结肠、外周血白细胞 【4】。用Trizol试剂盒严格按RNA提取试剂说明书操作进行总RNA的提取，然后进行RT-PCR反应，琼脂凝胶电泳进行产物分析，最后统计学处理。结果AL患者外周血中FOX0l的表达量明显高于对照组。 转录因子叉头框蛋白的临床意义【5】：Ciechomaska等报道PI3K抑制剂LY29400促使胶质瘤C细胞中的F0X01蛋白进入细胞核，抑制细胞增殖；但不能促进Fasi的表达及细胞凋亡；在骨髓瘤MM.IS细胞株中，LY2940002激活Foxol，上调p27K ipl， 使细胞阻滞于G期。本实验结果显示，A L患者外周血中FOXO1的表达量明显高于对照组，提示FOXO1可能参与A L细胞的凋亡和增殖。 （三）骨桥蛋白的表达检测方法及临床意义【7】【8】 方法：骨桥蛋白(osteopontin， OPN )是一种分泌型磷酸化糖蛋白，近年来的相关研究表明，该蛋白与肿瘤的转移、浸润、复发有关。【6】OPN通过与各种细胞受体相互作用促进肿瘤细胞的迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,并促进细胞外基质重塑和血管生成。然而OPN与急性髓系白血病的关系,目前国内外研究仍较少。采用免疫组化法对临床标本进行骨桥蛋白的表达检测，为临床提供诊断依据。首先常规做骨髓组织病理切片，然后用ELISA法检测外周血清中OPN的含量并进行统计。结果OPN蛋白在AML骨髓组织的表达明显高于非肿瘤患者骨髓组织。 骨桥蛋白的临床意义：AML患者骨髓组织OPN表达明显高于非肿瘤患者骨髓组织，提示OPN在AML发病中可能起作用，进一步用ELISA法检测初AML、 化疗缓解