脑缺血与凋亡相关基因的变化.docVIP

脑缺血与凋亡相关基因的变化 曹阳 广州市红十字会医院 　　一般认为，脑损伤引起的急性期神经元死亡是以坏死为主，而继发死亡或迟发死亡则以凋亡为主，大约有50%的细胞死亡是由凋亡引起。前者发生在缺血后早期的中心区，后者多发生在缺血后的半影区。细胞的凋亡与坏死其本质区别在于凋亡是一种主动死亡过程伴随基因转录和蛋白质合成特征性变化是DNA的寡核小体间裂解在凝胶电泳时呈现特征性的“DNA梯”。细胞凋亡的形态学特点是细胞核染色质固缩细胞膜发泡细胞器紧缩凋亡小体形成与呈现“DNA梯”电泳图谱。细胞凋亡是机体在内外环境刺激下启动自身机制由基因调控的细胞死亡过程，需新的mRNA表达和蛋白质合成过程。细胞凋亡是一个瀑布式基因表达过程，许多基因包括原癌基因与抑癌基因均参与细胞凋亡的调控，细胞凋亡过程中涉及某些基因的活化，并且受基因密码的调控，因此有人将此种由遗传因素决定的细胞凋亡的基因称为“亡基因”。在脑损伤中 Fas是人们在研究膜蛋白抗体的溶细胞作用时被发现，进而从细胞毒T细胞系分离了Fas 的配体（Fas ligand，Fasl），从而建立了 Fas/Fasl细胞凋亡信息传递系统。结构分析证实Fas是I型跨膜蛋白，分子量45KD，属肿瘤坏死因子（TNF）和神经生长因子（NGF）受体家族。Fasl是一种分子量约40KD的II型跨膜蛋白，属TNT家族成员。Fas含死亡结构域（DDs），与Fas 发生反应的蛋白是 Fas 死亡结构域相关蛋白（Fas associated death domains,FADD），Fas与FADD通过DDs形成二聚体而相互作用。FADD N末端称为死亡效应结构域（death effector domain），该结构负责将凋亡信号传递至Caspase-8，使之活化，从而启动Caspase级联反应，细胞产生凋亡 。研究发现，持续局灶性脑缺血可诱导Fas编码基因变异形成了sFas，其缺乏跨膜蛋白，sFas与Fas竞争结合Fasl，Fas与可溶性Fasl（sFasl）结合，发出凋亡信号，并传递至细胞核内，调节基因转录而诱导靶细胞凋亡；而sFas缺乏跨膜蛋白的死亡结构域（DDs），不具生物活性，sFas与Fasl结合后，信号无法通过细胞膜传递至胞内，从而抑制凋亡。 7 立早基因(immediateearlygenes，IEGs)C-fos与C-jun IEGs是脑缺血后快速而短暂表达的一簇基因的统称，现研究较多的有c-fos和c-jun家族。c-fos和c-jun表达的蛋白是转录调控因子，通过形成二聚体的形式结合在靶基因的DNA相关序列即AP-1位点，影响靶基因的表达，参与信号转导。c-fos在脑缺血中是起保护还是损伤作用一直有争议。有实验表明N-乙酰基-O-甲基多巴胺(N-acety-O-methyldopamine,NAMDA)在缺血刺激下能上调c-fos的表达，CA1神经元c-fos的早期表达增加能上调存活基因的表达而产生神经保护作用。局部脑缺血后，C-fos蛋白通过上调神经营养因子发挥神经保护作用，抑制C-fos蛋白的表达能使脑梗面积增大。也有实验表明局部脑缺血能诱导大脑皮质中C-fos和C-jun蛋白的大量生成，且与神经功能的缺陷程度成正相关。使用血管紧张素受体拮抗剂能降低脑中C-fos和C-jun蛋白的表达，改善脑缺血损伤的恢复。 C-fos与C-jun均为原癌基因，正常情况下，C-fos与C-jun在神经元中仅呈极低水平表达，而脑缺血与再灌注后即被快速而短暂地诱导表达。研究表明，大鼠大脑中动脉阻断1h后，C-fos与C-jun mRNA表达开始升高，主要位于半暗带区和梗死周边的正常组织。其促凋亡的机制可能为：其产物fos、jun经亮氨酸拉链，联合为杂合二聚体，即转录因子AP1，特异性与DNA上AP1结合位点结合而启动晚期效应基因的转录，从而促进凋亡。也有学者认为C-fos 的表达具有神经保护作用。在脑缺血研究中发现，将形成梗死灶的缺血中心区C-fos不表达或轻微表达，而半暗区C-fos表达明显。全脑缺血中，能耐受缺血的齿状回C-fos表达最快，最明显，而海马区(尤其CA1区)表达弱且延迟，说明其早期表达对缺血后细胞的存活具重要神经保护作用。 三、展望 脑缺血后神经元凋亡受一系列基因调控。神经元凋亡可能是通过启动细胞自身内部的死亡机制发生的。我们了脑缺血再灌注后as、TNFR1、p53、c-Myc、P-ERK、P-p38等在海马区的表达及Bcl-2过度表达对其的影响。结果发现，大鼠脑缺血再灌注后，as、TNFR1、p53、c-myc、P-p38蛋白在海马CA1区及CA3区均有表达，但CA1区强于CA3区；P-ERK在CA1区及CA3区亦均有表达，但CA1区弱于CA3区；Bcl-2基因过度表达可明显减弱as、TNFR1