β-甘露聚糖酶产生菌R10的产酶特性的研究.pdfVIP

或心肌梗死，甚至危及生命。因此糖尿病是现代疾病中的第二杀手，对人体的危害仅次于癌症，目前根 治糖尿病的方法和药物还没有找到，对于糖尿病的治疗主要依靠饮食控制和药物控制治疗。 我国市场上销售的各类Q一葡萄糖苷酶抑制剂(拜糖平、倍欣等)大多从德国、日本进口的，价格 较贵。因此，研究和开发微生物发酵生产a一葡萄糖苷酶抑制剂，将具有很大的科学价值和经济效益。 参考文献(略) B一甘露聚糖酶产生菌R，o的产酶特性研究 熊邰，干信 (湖北工业大学生物工程学院，武汉430068) 魔芋及其相关产品的研究是在今十几年才开始的，甘露聚糖酶产生菌株和酶性质研究的报道近些年 有不少…叫1，但很少有关于魔芋飞粉(KonjacPowder，KFP)的微生物利用方面的文章。而魔芋 Flying 飞粉是魔芋产业化过程中的必然副产物，其主要成分是碳水化合物和蛋白质哺1。魔芋飞粉长久以来被当 作垃圾抛弃，造成极大的浪费和环境污染。本研究以利用魔芋飞粉为宗旨，从自然界筛选出能快速利用 魔芋飞粉并产生B一甘露聚糖酶的稳定菌株进行深层液态发酵，将垃圾转化成可广泛用于化工、饲料、食 品、医药等行业的酶制剂，为魔芋产业化和西部发展提供了新的思路。 1．材料和方法 1．1实验材料 1．1．1药品试剂 甘露糖为Sigma商品分析纯，其它定量试剂为国产分析纯。发酵实验所用药品均为国产化学纯；魔 芋精粉和魔芋飞粉为恩施产一级精粉和工业加工废料。 1．1．2仪器设备 温器(重庆实验设备厂)等。 1．1．3培养基 0．5％。细菌分离培养基：营养肉汤培养基。霉菌分离培养基： 为m／m)，牛肉膏0．3％，蛋白胨O．3％，NaCl 0．5％1基本产酶培 察氏培养基。基本发酵摇瓶培养基：魔芋精粉2％，牛肉膏0．3％，蛋白胨O．3％，NaCl 0．5％。 养基：魔芋精粉2％，牛肉膏0．3％，蛋白胨0．5％，NaCl 1．2实验方法 1．2．1菌种的筛选 · 5】8· 配制好菌种筛选培养基后，不灭菌直接倒平板，35C培养24h后，挑选液化现象最明显的平板，进 行划线分离和纯培养。 1．2．2菌种的鉴定 菌落形态观察；镜检观察：革兰氏染色；芽孢染色：鞭毛染色：葡萄糖发酵实验；接触酶实验：API 细菌鉴定系统。 1．2．3细菌生长曲线的制作 基本发酵培养基培养，装液量30ⅢL／250mL，接种量lmL(营养肉汤培养基，用斜面种子接种后，在 速度下进行)。每隔lh取少量发酵液做适当稀释后，在650r皿处测光密度。用未接种的发酵液稀释同样 倍数作空白。以时间为横坐标，光密度为纵坐标作图。 1．2．4酶活力的测定 积和标准曲线计算还原糖的量。酶活力定义为：在一定温度和pH下以磷酸缓冲液配制的0．5％魔芋精粉 u 溶液做底物的条件下，ImL酶液在Imin中内产生lmol甘薅糖为IIU。 1．2．5细菌产酶曲线的制作 取1瓶，测定酶活力。 1．2．6魔芋葡甘露聚糖酶解产物的薄层层析 对魔芋葡甘露聚糖(Konjac 糖、甘露糖等进行对比分析，得到KGM的酶解产物的组分。展层剂为正丁醇：乙醇：乙酸：水3：1：1：3， 显色剂：5mL浓硫酸溶于95mL 95％乙醇中，混合均匀后使用。 2．结果与讨论 2．1茵种的筛选 ， 经划线分离和纯培养，初筛得到霉菌2株(编号Rz和R5)，细菌1株(编号R。o)。经过实验发现霉菌 一步研究。 2．2菌种的初步鉴定 筛选得到的细菌R-o在营养肉汤斜面上生长能形成灰白色菌落，边缘光滑：与培养基结合较紧密，不 易刮取。在营养肉汤中静置培养能在液面形成半透明、微皱的有较好韧性的菌膜。镜检观察该细菌为长 杆状，有鞭毛能游动：革兰氏染色为阳性：芽孢中生，不膨大，呈卵圆形(见图1