加味连朴饮抗大鼠免疫性肝损伤的作用机理的研究.pdfVIP

第三届辛固中医药免疫学术研讨会论文汇编 加味连朴饮抗大鼠免疫性肝损伤的作用机理研究 高清华毕静范虹 (湖北中医学院。430065) [摘要] 目的：通过观察加味连朴饮对免疫性肝损伤大鼠的肝组织Bax、Bcl．2阳性表达率、 血清IL-lO、ILl2水平和肝组织病理改变的影响，研究加味连朴饮对免疫性肝损伤大鼠的肝组织 的保护作用，从而探讨加味连朴饮防治病毒性肝炎的药理学机制，为其临床应用提供实验依据。 方法：50只健康SD大鼠，雌雄各半，用普通食料喂养一周。将其标记后按随机数字表分为正常组、 模型组、加味连朴饮大、小剂量组，西药对照组，即环磷酰胺组共5组。采用卡介苗(BCG)加 脂多糖(LPS)建立免疫性肝损伤大鼠模型。模型组、中药大小剂量组和西药对照组。大鼠于实 7个活菌)。从实验第2天起，正常组、模型组开 验第l天腹腔注射卡介苗(BCG)8mg(约5×10 始灌服生理盐水5ml／kg．每天一次：中药大小剂量组灌服加味连朴饮，剂量分别为3ml／kg和6ml／kg， 每天一次；西药对照组腹腔注射环磷酰胺12．6mg／kg，隔日一次。第12天上午8时给药，下午3 时除正常组外所有大鼠腹腔注射LPS(30ug／kg体重)。5时开始眼球取血，后脱颈椎处死，取肝 右叶以4％多聚甲醛固定，作肝组织病理切片并测肝组织Bax、Bcl．2表达：分离血清，于-20℃冰 箱中冻存待检。测IL．10、IL．12水平。实验数据计量资料以(i±s)表示，组间比较用方差齐 性分析及t检验，P0．01为显著性检验界限。结论：研究结果表明免疫性肝损伤大鼠肝细胞有明 显的炎症坏死，细胞凋亡调节基因表达紊乱并见机体免疫功能失衡。肝组织Bax表达明显升高， Bcl-2表达明显降低；血清IL-10、IL．12水平明显升高。加昧连朴饮能够显著改善免疫性肝损伤大 鼠肝组织病理损害：能下调Bax表达，上调Bel-2表达，从而抑制肝细胞凋亡；能调节机体失衡 的免疫功能，表现在下调IL-10、IL．12的水平。研究结果提示加味连朴饮对免疫性肝损伤大鼠肝 脏有明显的保护作用，能减轻免疫性肝损伤时的肝损害，改善肝脏的功能，其抑制肝细胞及调节 免疫紊乱可能是其防治病毒性肝炎的作用机制之一。 【关键词】病毒性肝炎，机制；免疫性肝损伤；加味连朴饮；动物实验 一．实验材料与方法 ． 1．实验材料 供。 1．2．药物； 1．2．1． 处方来源： 连朴饮出自清代温病学家王孟英《霍乱论》，主治湿热蕴伏之霍乱症。原方组成：黄连、山栀、 厚朴、半夏、菖蒲、香豆豉、芦根。近代众多医家均扩大其适应范围，如赵绍琴等《温热纵横》 中篇各论用其治湿温病热并重证。根据本方的组方原则，结合现代中草药研究成果，及名老中医 李培生临床经验，取该方辛开苦降功效，针对湿热中阻脾胃的病机，以连朴饮去芦根、浚豆豉， 加藿香、土大黄等。加味连朴饮方：黄连、厚朴、藿香、全蝎、土大黄、石菖蒲等。 以上药物饮片均由湖北中医学院附属门诊部药房提供。煎剂相当于2．O咖l。药物制备方法： 先将藿香、厚朴、石菖蒲等含有挥发油的药物置于2000ml的圆底烧瓶中，加入约10倍量药物的 第三届争困中医药免疫学术研讨会论文汇编 水浸泡30rain后，用挥发油提取器提取挥发油，挥发油用容器另存；并将提取挥发汕后的药液及 药物残渣加入其他药物中。用适量的水浸泡30rain后。煎煮三次．每次煮沸后均用文火煎煮-4, 时，然后过滤，与旋转蒸发仪器80X2浓缩，取挥发油，药液和少量吐温．80共同研磨，分别配置 浓度为200％的药液，以上药液均在超声震荡器中震荡30min后在3000r／min离心取上清液备用， 放在4C保存。按70kg成人计算。每日服用清热化湿合剂量100ml，此剂量为中剂餐，用实验动 物与人的体表面积比来进行等效剂龟换算，大鼠中剂量为200％药液2ml。(相当于生药49) 1．2．2．环磷酰胺由江苏恒瑞医药股份有限公司提供，批号为010458。 1．3．试剂 1．3．1．冻千卡介苗制剂(DCG)由上海生物制品研究所提供。 1．3．2．脂多糖(LPS)由美国Sigma公司提供。 试剂盒由上海森雄公司进口分装。 1．4．仪器 HH—W21．600电热恒温水温箱、LD5．2