表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法的研究.pdfVIP

微生物与感染 2008 年 3 月第 3 卷第 1 期 　Journal of Microbes and Infection ,March 2008 ,Vol 3 ,No . 1 ·11 · 　　　　 表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法的研究 娄 　强 　朱 　涛 　王家学 　吴 　　 　朱于莉 　瞿 　涤 　　【摘要】　目的 　探讨高效的表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法 。方法 　分别应用 2 种不同的穿梭质粒 pMAD 和 pBT2 ,连接 目的基因表皮葡萄球菌双组分信号转导系统 arlS 、saeRS 和 lytS 的上下游片段 ,构建重组质粒 , 电转入金黄色葡萄球 Δ Δ 菌 RN4220 后转入表皮葡萄球菌 1457 ,利用抗性和生物标志筛选出针对特定 目的基因的突变株 SE1457 arlS 、SE1457 saeRS 和 Δ Δ Δ SE1457 lytS , 比较 2 种方法的优 、缺点 。结果 　利用 pMAD 和 pBT2 分别构建基因删除同源重组质粒 pMAD saeRS 、pBT2 arlS Δ 和pBT2 lytS ,并均获得相应的表皮葡萄球菌基因删除突变株 。在筛选过程中 , 以pMAD 为载体构建基因删除突变株 ,仅需 1 轮抗性/ 蓝白斑筛选过程即获突变株 ;而以pBT2 为载体构建基因删除突变株筛选方法 ,需经过 5～10 轮的筛选才可获得突变 ( ) Δ 株 。基因删除突变株经聚合酶链反应 PCR 和测序等鉴定确认 。与野生株相比 , SE1457 arlS 突变株的生物膜形成能力降低 Δ Δ 9096 % ,而 SE1457 saeRS 和 SE1457 lytS 株的生物膜形成能力略有增加 。结论 　以pMAD 载体构建表皮葡萄球菌突变株比 较快速和简便 。 【关键词】　基因删除 ; 　pMAD ; 　pBT2 ; 　表皮葡萄球菌 ; 　双组分信号转导系统 Methods of constructing Staphylococcus epidermidis gene mutants via different plasmids L OU Qiang , ZHU Tao , WAN G J iax ue , WU Yang , Zhu Yuli , QU Di . ( Ministry of Education/ Ministry of Health Key L aboratory of Medical Molecular Virology , Institutes of B iomedical Sciences and Institute of Medical Microbiology , S hanghai Medical College , Fudan University , S hanghai 200032 , China) 【Abstract 】　Objective 　To construct Stap hy lococcus ep idermoidis gene knockout mutants with different plasmids. Methods 　 Recombinant plasmids were constructed for homologous recombination of two componen