ε聚赖氨酸高产菌株的选育.pdfVIP

维普资讯 垄 鱼 丝 8．聚赖氨酸高产菌株的选育 贾士儒 董惠钧 姜俊云 刘伟成 (天津科技大学生化工程研究室，天津，300222) 摘 要 依据传统诱变理论和白色链霉菌生物合成 ￡一聚赖氨酸的特点，确立了以枯草芽孢杆菌为 敏感菌株，抗性突变株筛选和抑茵圈法相结合的初筛方法。在优化诱变条件的基础上，以白色链 霉菌为出发菌株，经紫外线-q硫酸二乙酯诱变，选育出一株遗传性状稳定，遗传标记为AEC+Gl 的￡～聚赖氨酸生产菌株，其产量可达0．79g 。 关键词 ￡一聚赖氨酸，白色链霉菌，诱变育种 有机食品是世界食品工业发展的趋势，食 (％)：贝特纳培养基+AEC。 品防腐剂的天然化成为这一趋势的必然要求。 (4)甘氨酸抗性培养基 (％)：贝特纳培养 目前e一聚赖氨酸是最具优良性能和巨大商业价 基+甘氨酸。 值的生物防腐剂之一…。它是含有25～30个 1．3 试 剂 赖氨酸残基的阳离子聚合多肽，当聚合度低于 2％硫代硫酸钠溶液，pH7．2磷酸缓冲溶 10肽，会丧失抑菌活性_2J。￡一聚赖氨酸抑菌谱 液。 广，在酸性和微酸性环境中对革兰氏阳性菌、革 1．4 诱变育种 兰氏阴性菌、酵母菌、霉菌均有抑制作用，而且 (1)紫外(uV)诱变：制备孢子悬浮液，取5 对耐热性芽孢杆菌和一些病毒也有抑制作 mL于夺9cm无菌平皿中，置于功率为 15w 的 用_3J。同时，其热稳定性高，水溶性好，食用安 紫外灯下60cm处，照射一定时间。 全，因此，广泛用于食品保鲜_4J。此外，在基因 (2)硫酸二乙酯 (DES)诱变：在装有 19．0 治疗[、微囊药物的制备[、高分子材料等领 mLpH7．0磷酸缓冲液的试管中，加入 1mL单 域中，e一聚赖氨酸亦有着广泛的用途。文中以 孢子悬浮液，再加入 DES溶液，37℃恒温水浴 筛选获得的白色链霉菌为出发菌株，通过紫外 保温一定时间。 线与硫酸二乙酯等的诱变处理，对e一聚赖氨酸 1．5 筛选方法 高产菌株进行了筛选。 (1)菌株初筛和第 1次复筛方法：琼脂块 抑菌圈法，将从 AEC和Gly抗性平板上挑选 1 材料和方法 出的突变株连同培养基琼脂块切下后，嵌入同 1．1 出发菌株 样大小的培养基孔中，30℃培养72h，测定抑 白色链霉菌(Streptomycesalbulus)TF一1。 菌圈直径。 1．2 培养基 (2)二次复筛方法：将第 1次复筛得到的 (1)贝特纳斜面培养基 (％)：葡萄糖 1．0， 菌株通过发酵测定 ￡一聚赖氨酸产量。 蛋白胨 0．2，酵母浸膏0．1，琼脂 1．5。 1．6 分析方法 (2)种子和发酵培养基(％)：葡萄糖 5．0， (1)生物量测定：干重法测定。 酵母浸膏0．5。 (2)残糖测定：SBA一40C生物传感分析 (3)AEC(S-氨乙基半胱氨酸)抗性培养基 仪。 第一作者：博士，教授(博士生导师)。 *天津市与教育部共建项目(No．GJDF03) 收稿时间：2004一O4一O2，改回时间：2004一O9—13 (14) 维普资讯 (3)pH测定：PH