朊蛋白基因在金黄地鼠脑与外周组织的动态表达定量.pdfVIP

第27卷增刊 内 蒙古农业大学学报 V01．27 02S 2005年7月 Jul2005 ofInner Journal MongoliaAgriculturalUniversity 文章编号：1009—3575(2005)02S一0058—02 朊蛋白基因在金黄地鼠脑和 外周组织的动态表达定量。 ． OFPRIONGENEDYNAMICEXPRESSION QUANTIFICATION INBRAINANDPERIPHERALORGANSOFGOLDENHAMSTER 宁章勇．赵德踞 (中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室，北京100094) 1引言和目的 传染性海绵状脑病(TSE)的发生的关键环节是机体正常编码的细胞型朊蛋白发生构象的变化而形成致 病性的朊蛋白。TSE的病理改变主要发生在中枢神经系统，在TSE的亚临床阶段。外周器官特别是淋巴器 官在疾病的发生过程中起着重要作用。参与TSE发生和发展的神经性和非神经组织自身朊病毒的表达，已 经成为了研究的焦点；朊蛋白基因表达的定量是研究动物传染性海绵状脑病发生的出发点，对探索动物传染 性海绵状脑病的发生机理具有重要的意义。同时，组织特异性的表达模式也是对PrPC在组织器官内的基 本功能认识的有效途径。目前。国际上对基因表达的检测采用实时荧光定量PCR方法对未知样品进行基因 表达的定量。金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想实验动物。对于实验性传播海绵状脑病的研究 具有重要意义。 2方法 2．1标准曲线的制备 采用各种年龄段金黄地鼠的中枢和外周器官进行组织总RNA的提取；根据保守序列设计的引物，采用 RT—PCR进行目的基因片断的扩增；PCR产物纯化后，与载体连接、转化．进行标准品质粒的提取、鉴定和 定量。利用标准质粒，构建标准回归曲线和标准动力学曲线，而后进行灵敏度和可靠度的检测。 2．2朊蛋白基因在金黄地鼠脑和外周组织的动态表达定■ 根据统计学原则，采用组内和组间标准差异的原则，利用构建的标准曲线进行朊病毒基因在金黄地鼠脑 和外周组织的动态表达定量。 2．3朊蛋白基因在金黄地鼠脑和外周组织的衰达模式建立 利用朊蛋白基因的动态表达数据库，进行朊蛋白基因在金黄地鼠脑和外周组织的表达模式的建立。 3主要的结果 3．1成功的构建了朊聋白基因表达检测的标准品质粒和标准曲线 标准曲线的线性相关良好，灵敏度高，组内和组建变异小、可靠性良好。 3．2基因表达的绝对定量 朊蛋白基因mRNA的绝对定量。根据金黄地鼠的年龄特点获得了各组织器官朊蛋白基因的动态表达定量 。嚣蒌暑羿：2宁00·5勇-0(619-782—0)，男．在读博士罾f究生．研究方向：分子捕理学 增刊 宁章勇等：朊蛋白基因在金黄地鼠脑和外周组织的动态表达定量 59 数据库。 3．3朊蛋白基因表达模式的构建 朊蛋白基因的表达模式为脑和淋巴器官与其他外周器官差异显著，脑和淋巴器官的表达元显著差异，其 他外周器官表达也无显著差异。 4主要的结论 金黄地鼠朊蛋白基因的表达与器官发育、分化的时空顺序相一致，不同组织中PrPc表达的潜能与朊病 的早期发病原因直接相关；组织的朊蛋白储量，与各器官在朊病发生、发展过程中作用具有重要意义。 大脑是人类CJD疾病的重要靶器官，与大脑朊蛋白基因组织储量高密切相关。小脑是疯牛病、羊痒病 的重要靶器官，与小脑的高表达量和高组织储量相关。脑干的表达量和组织储量在中枢神经系统的最高，这 揭示了为什么在进行疯牛病、羊痒病检测时选择脑干作为病理检测的黄金位点。淋巴器官中朊蛋白基因的 表达水平很高，证实了朊蛋白在免疫系统中的作用及朊蛋白和免疫系统