山羊卵母细胞冷冻保存技术的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 I 山羊卵母细胞冷冻保存技术研究 许丹宁1，黄运茂1，陈欢2，田允波p (1．仲恺农业工程学院生命科学学院，广东广州510225；2．牡丹江师范学院生命科学与技 术学院，黑龙江牡丹江，157011) 引言 山羊是研制转基因动物的理想模型，冷冻保存山羊卵母细胞对于体外受精、核移植、转 基因等相关技术的研究具有重要的应用价值。本试验采用PROH、DMSO、甘油作为冷冻保 护剂，选用常规冷冻法和OPS玻璃化冷冻法，研究冷冻保存技术对山羊不同时期卵母细胞冷 冻解冻后进一步发育的影响，旨在探索适合山羊卵母细胞冷冻保存的稳定可靠方法。 材料与方法 采用常规程序冷冻法，冷冻山羊GV期和IVM卵母细胞，比较PROH、DMSO及甘油对 GV期卵母细胞解冻后成熟率、IVM卵母细胞受精率的保护作用；以PROH做为冷冻保护剂， 比较常规程序冷冻法和OPS玻璃化冷冻法对不同发育时期(GV期、9h、IVM)卵母细胞的 成熟率及受精率的影响。 结果 3种不同的冷冻保护剂对山羊GV期和IVM卵母细胞解冻后正常形态的保护效果有显著 但二者之间的保护作用无显著性差异(户|0．05)。对各期卵母细胞进一步发育的影响也具有 ‘ 和甘油(14．1％)(Po．05)。 常规程序冷冻和OPS玻璃化冷冻法，GV期卵母细胞的成熟率分别为21．3％和29．9％， 受精率分别为6．3％和9．1％；培养9h卵母细胞的成熟率分别为20．5％和32．0％，受精率分别 常规程序冷冻法(Po．05)。 讨论 冷冻保存山羊卵母细胞可为进一步的研究提供大量原材料，提高优质卵母细胞的利用 率，具有重要的经济效益，本研究结果发现PROH具有较好的冷冻保护作用，PROH毒性比 DMSO小，渗透性极高，能在卵母细胞冻结前渗入细胞内，还有助于细胞质在冷冻过程中变 为玻璃化状态，提高细胞在低温下的稳定性，限制解冻时冰晶的形成，保证细胞的存活率。 OPS玻璃化冷冻法是采用拉细开口型细管对卵母细胞进行冷冻，与常规冷冻法采用的细管相 比，可大幅度提升降温和解冻时升温的速率，减少冷冻液的用量，且操作简便，不需要昂贵 的降温设备，本研究的结果也显示对不同发育时期卵母细胞冷冻保护效果明显优于常规程序 冷冻法。综上所述，采用PROH冷冻剂和OPS玻璃化冷冻法，可有效提高不同发育时期卵 母细胞冷冻解冻后的进一步发育能力，研究结果可为卵母细胞冷冻保存技术提供理论依据， 具有重要的实际意义。6 基金项目：农业部公益性行业(奶山羊)科研专项(201103038) 作者简介：许丹宁0978-)，女，汉族，博士，副教授，主要从事动物营养生理及动物繁殖生物技术研究。 。通讯作者：田允波(1965-)，男，博士，教授，博士生导师。E-mail：tyunbo@126．com 42