灵芝孢子粉多糖色谱指纹图谱和其免疫活性谱效关系的初步研究.pdfVIP

2011Int锄撕伽吼l 2011国际灵芝研究学术会议m Me葩ng∞G硎。棚鼢search鲤修 灵芝孢子粉多糖色谱指纹图谱 及其免疫活性谱效关系的初步研究 王浩豪，戴军‘，陈尚卫，朱松 (江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡，2141222) 由于多糖组成和结构的复杂性，目前尚缺乏有效的表征和鉴别灵芝及其孢子粉中活性多 糖的检测方法及其质量标准。本文采用部分酸水解耦合PMP柱前衍生高效液相色谱法检测和 表征不同来源的灵芝孢子样品中多糖的组成特性，并建立灵芝孢子粉多糖的色谱指纹图谱。 通过MTF实验研究灵芝孢子粉多糖对淋巴细胞增殖的促进效应，以考察免疫活性与多糖指纹 图谱之间的谱效关系，并应用于市场上灵芝类产品中多糖的质量评价。 实验方法：称取破壁灵芝孢子粉样品59加入150mL超纯水，于水浴70℃超声50min， 冷却后离心，残渣用少量超纯水洗涤并离心后，将两次上清液合并，超纯水透析24小时，真 空浓缩至10ml直接用于下步水解及衍生，或冻干备用。灵芝孢子粉多糖促进淋巴细胞增殖活 性实验采用MTF法。 结果与讨论：按上述方法对15批不同来源的灵芝孢子粉多糖进行HPLC分析和比较，结 果见图l。其中19个峰为共有特征指纹峰，且共有峰总面积占总峰面积的95％以上。在共有 指纹峰中， 2号、15号(s峰)、16号和19号峰的峰面积均大于总峰面积的5％。各共有峰 号峰分别为甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、 阿拉伯糖、岩藻糖。将色谱数据导入指纹图谱专用软件中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版，得到灵芝孢子粉多糖的标准色谱指纹图谱于图2。 图1 15批灵芝孢子粉多糖的色谱指纹图谱 2011国际灵芝研究学术会议The2011Int哪lati。姐l Mecting。nG锄。沈朋口Research鲤矽；势 图2灵芝孢子粉多糖的标准色谱指纹图谱 对15批灵芝孢子粉多糖的指纹图谱进行相似度分析，结果表明，同一产地不同批次产品 间的相似度较高，大于O．97；不同产地产品间的相似度较低，但均大于O．80。对20种不 同产地、不同批次的灵芝孢子粉多糖做促进淋巴细胞增殖活性的实验，结果见表1。 表l 20种灵芝孢子粉多糖促进淋巴细胞增殖实验结果 利用spssl6．0软件对样品l～20的表l数据与各样品指纹图谱共有峰相对峰面积数据进行 多元回归分析，选择强迫引入法，得到能够表征灵芝孢子粉多糖药效的多元线性回归方程， 每个变量的回归系数见表2。 表2强迫引入法引入各色谱峰的标准化回归系数 第一作者：王浩豪(1988．)，女，硕士研究生