球茎甘蓝细胞质不育相关基因orf138克隆.pdfVIP

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2017-08-12 发布于安徽
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园艺学报2009，36(增刊)：1966 AetaHorticulturaeSinica 球茎甘蓝细胞质不育相关基因orfl38的克隆陈烨丽1’2，薄天岳1，陈学好2，陈锦秀1，缪体云1 (1上海市农业科学院园艺研究所，上海市设施园艺技术重点实验室，上海201106；2扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州225009) 细胞质雄性不育(CMS)在高等植物中普遍存在。尽管对细胞质雄性不育分子机理的研究取得了不少进展，但离完全揭开细胞质雄性不育机理还有一定的距离。分离鉴定和克隆与CMS相关的基因以及对其某些功能性区域进行分析，是深入研究CMS的必然途径。许多十字花科作物雄性不育基因相关研究已有大量报道，而有关球茎甘蓝细胞质雄性不育的相关研究报道甚少。供试的球茎甘蓝材料由上海市农科院园艺研究所提供，采用改良的CTAB法提取总DNA。运用同源序列的候选基因法，根据GenBank中登记的D胡38基因保守区序列设计了一对特异引物，上游 mmol· 海生工生物工程技术服务有限公司合成。PCR反应体系为20斗L，包括：ddH：O6．4卜L，25 Bufier mmol·L“dNTP 2．0仙L，10×PCR2．0仙L，10 0．4“L，5U·斗L一1z幻DNA聚合酶 L～MgCl2 0．2灿，10ng·斗L一引物3．0斗L，10ng·止。1模板DNA3．O肛L，加盖一滴矿物油进行扩增。PCR 扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性lmin，52℃退火1min，72℃延伸1．5min，35个循环； 72℃延伸10 胶回收试剂盒回收扩增产物中的特异条带，DNA序列测定委托上海生工生物T程技术服务有限公司完成。用DNASTAR软件分析特异的核苷酸序列后在NCBI网t进行同源性比对。试验结果表明，用设计的offl38引物对球茎甘蓝不育系及其保持系材料的DNA进行扩增，扩增产物在材料间存在差异，在不育系中扩增出750 bp左右的条带，而在保持系中没有扩增产物，存在软件分析结果表明该特异片段长度为749 oleracea sativus及2个Brassicavar．italic线粒体源性比对发现，该序列与Brassicasp．，Raphanus D孵38基因(登录号分别为Z12626，zl 育系与可育系中的含量差异很小，且是由于翻译或者翻译后加工造成的；高含量ORFl38不能造成线粒体功能上的不育，Ogura基因型与组织特异性蛋白表达不相关。如今。矿38基因具体如何影响雄性不育尚没有定论，因此有关o(138基因影响雄性不育的机制是一个值得深入研究的课题。关键词：甘蓝；细胞质雄性不育；基因中图分类号：S635 文献标识码：A 文章编号：0513-353X(2009)S-1966-01 收稿日期：2009-08一04