犬细小病毒基因型的调查的研究(P20-26).pdfVIP

犬细小病毒基因型的调查研究 谢之景，夏咸柱，扈荣良 中国人民解放军军需大学军事兽医研究所，长春130062 黄耕赵忠鹏 叶俊华，徐黎，马长书。徐玉生 公安部南昌警犬基地，南昌，330100 摘要：本试验采用PCR方法扩增了13株犬细小病毒(CPV)的VP2基因的两个片段，通 过序列测定和DNAStar软件分析，结果我国的CPV分离株也存在基因变异现象，除发现 CPV一2，CPV一2a，CPV一2b突变株外，还发现在CPV一2a基础上进一步进化产生的两个 新的变异株。在我国，CPV一2曾在20世纪80年代早期流行，但1986年后分离CPV以 CPV一2a的基础上VP2发生氨基酸5645-,N替换，其确切的生物学意义尚不清楚。我国的 CPV分离株与参考毒株的核酸的同源性超过98％，没有形成明显的中国CPV分支，进化方 式与文献报道的进化方式一致。该研究是国内第一次从分子水平对CPV的变异情况进行 调查，为分析CPV免疫失败及其新的疫苗研究提供了实验依据。 关键词：犬科动物，CPV，VP2基因．变异 中图分类号：S852．65文献标识吗：A 文章编码： 前言：犬细小病毒(canine parvovirus；CPV)是细小病毒科细小病毒属成员，主要引起 犬的出血性肠炎和幼犬心肌炎；自1978年分离成功以来，已传遍所有养犬国家和地区，为 了与犬极小病毒(MCV)相区别而命名为CPV一2f1、2、”。CPV与猫泛白细胞减少症病毒 (FHN)，水貂晒炎病毒(MZV)等细小病毒的核酸同源性超过95％。对不同分离株韵基因序 列分析发现，CPV容易通过抗原漂移产生新的突变株，有5个亚型：CPV一2，CPV一2a， CPV一2b，CPV一2c(a)flCPV一2c(b)“J·“7·”鲴小病毒的中和抗原位点位于VP2上”·”” ”l，VP2上几个关键碱基积氮基酸的改变就会改变抗原特征和宿主范围”tt”·…。CPV一2 只感染犬，不感染猫科动物；CPV一2a和CPV一2b不仅能感染犬，而且还能感染猫科动物， 但是其对猫科动物的致病性比FPV弱。能在猫科动物体内持续存在。CPV一2a和CPV～2b 在猫体内进一步进化形成两个新的CPV突变株CPV一2e(a)和CPV一2c(b)，对猫的致病性 (b)的报道。我国虽然分离到多株CPV．并有人对CPV内蒙株(CPV—IM)进行了序列测定 …1但是有关的变异及流行情况并未见报道。为此，本实验室在1983--2002年近20年问从 吉林、北京、山东、贵州、云南等地分离获得了13株CPV，为了对我国CPV分离株的基因变 异情况有一个全面的了解，本研究对13株CPV进行了VP2基困的扩增、序列测定和比较， 并对CPV—IM的VP2基因进行了比较分析。研究发现，我国CPV分离株不但存在CPV一 2a，CPV一2b等变异株．而且还出现了CPV一2a的2个新变异株。该研究为CPV的防治研 究和疫苗的研制提供了更为直接的理论基础。 一20一 1材料与方法 1．I病毒 本实验室分离鉴定的13株CPV样病毒。为了便于描述，按病毒类型／宿主／地点／序 (2002年，山东，犬，1)。 1。2引物及PCR反应条件 Ex Taq酶：TaKaRa Taq(宝生物工程(大连)有限公司) 通用引物，选择FPLV、CPV以及FPV样病毒的保守序列作为引物序列扩增VP2基因的两 014bp)， 个片段。第一对引物(XCPVPI)扩增片段为2954—3799bp(在VP2基因的169—1 上游引物(XCPVFI)为5’～GGATGGGTGGAAATCACA GC一3’，下游引物(XCPVPd)为5‘ AAC 一AI：AACC hy