细胞膜色谱法和其在中药研究中的应用进展.pdfVIP

第十四次全田中医药文化学术交流会 细胞膜色谱法及其在中药研究中的应用进展 张聪聪 西南大学药学院 membrane 【摘要】结合相关文献，分析细胞膜色谱法(cell 状，对目前CMC在中药研究中的现状做一概述。CMC是由贺浪冲教授在1996年创建的一种新型的具 有生物活性的亲和色谱技术，将高效液相色谱、细胞生物学与受体药理学结合起来。通过将活性细 胞膜固定在特定载体表面，制备成细胞膜固定相，用液相色谱的方法研究药物与固定相上细胞膜及 膜受体的相互作用，利用药物与膜受体间存在的特异亲和力，将药物在体内的作用过程在色谱柱内 进行动态模拟。随着CMC研究的不断深入，其在中药效应成分的研究领域取得突破性进展是可以预 期的。 【关键词】细胞膜色谱法；制备；有效成分：应用 1．引言 到重视。直到1933年Clark幢1首次完成了用数学公式来描述药物和受体相互作用的工作之后，受体 理论被用于药理学研究中。研究药物与受体相互作用是受体药理学的主要内容，在受体药理学形成 与发展进程中，各种新技术不断涌现，如放射性配体分析技术(RBA)和离体器官受体功能分析方法Ⅱ1。 这两种方法在受体动力学进展中发挥了巨大推动作用，并作为经典方法一直沿用至今。但是，RBA 不能直接反映药物与受体作用力类型和立体选择性，而且会对环境造成同位素污染，同时将放射性 原子结合到大多数药物结构上的技术有限。功能分析方法具有可同时分析药物功能特性及其亲和力 和内在活性的优点，但研究效率较低H’。CMC将高效液相色谱、细胞生物学与受体药理学相结合，利 用药物与膜受体间存在的特异性亲和力，将药物在体内的作用过程在色谱柱内进行动态模拟。该方 法是将活性组织细胞膜固定在特定载体表面，制备成细胞膜固定相(CMSP)，用液相色谱的方法研究 药物或化合物与固定相上细胞膜及受体的相互作用哺删。这种色谱系统能模仿药物与靶体的相互作 用，药物与细胞膜及膜受体的相互作用，能用色谱的各种表征参数定量表征。CMC作为一种重要的 生物膜色谱类型，对中药有效成分的筛选及中药作用机制的阐明产生巨大的推动作用。本文对细胞 膜色谱法技术的应用现状做一综述。 2．细胞膜色谱法及其特性 285 第十四次全国中医药文化学术交流会 将活性细胞膜固定在某种载体表面，形成载体细胞膜。该法最大限度地保持了细胞膜的整体性 和酶活性及膜受体的立体结构和周围环境。 2．1细胞膜的制备 细胞通过置于低渗溶液中破裂，离心除去细胞核等物质，然后再次离心得到细胞膜。细胞膜的 纯度可以通过扫描电镜确定，电镜下细胞膜的片状物及由膜性结构卷曲成的小泡，说明细胞膜的制 备方法可行盯1，并测定细胞膜悬液的总ATP酶活性和膜的蛋白水平。 2．2CMSP的制备 CMC的关键在于CMSP的制备，将活化的硅胶置于低温反应管中，加入细胞膜悬液，直至达到吸 附平衡。整个吸附过程在真空装置中超声作用下进行，以使细胞膜在硅胶表面分布均一。然后，向 反应管中补加等体积的去离子水，使细胞膜的磷脂双分子层进行自身相互作用，直至硅胶表面形成 均匀的细胞膜。离心除去上清液。CMSP用Tris盐酸缓冲液洗涤，除去未结合的细胞膜，制成的细 胞膜固定相(CMSP)在几天内可保持受体蛋白的立体结构和生物活性。 2．3色谱柱的制备 做细胞膜的吸附等温线，计算硅胶饱和吸附量阳1，然后制备相应膜固定相的细胞膜悬液。取活 化硅胶，加入细胞膜悬液，将细胞膜固定于硅胶载体表面。通过扫描电镜和能谱法确定细胞膜完全 覆盖硅胶表面，然后用低压湿法加入不锈钢色谱柱中。 2．4CMSP的表面活性 溶液中硅胶表面上的硅醇基对生物大分子的吸附性很强，通常认为是不可逆的。它们会与膜蛋 白和脂类分子中的极性基团作用¨1，细胞膜被牢牢地吸附在硅胶的表面。同时，细胞膜的磷脂双层 结构使其具有两种很强的相互作用：细胞膜极性头间的离子相互作用和膜内部烷基链间的疏水相互 作用。吸附在硅胶表面的细胞膜碎片间彼此靠近而融合，并自动形成闭合结构，结果硅胶表面完全 被细胞膜覆盖。通常用的化学键合方法则由于空间效应，无法实现对硅胶表面硅羟基的完全覆盖。 3．CMC