猪繁殖和呼吸综合征病毒准种多样性在抗体选择压下的演变.pdf

第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) 猪繁殖与呼吸综合征病毒准种多样性在抗体选择压下的演变 赵鹏，马诚太，董 宣，崔治中 8) (山东农业大学动物医学院，山东泰安，27101 不同准种的序列差异；60条核酸序列中17条序列完全相同，代表了在该种群中占主体的优势准种的序列。为了研究PRRSV 病毒按针对原始毒的方法扩增其ORF5基因进行准种多样性分析。结果显示SD0612株在有抗体的两次连续传代中准种的多样 性均在减少，其优势准种在种群中的比例在上升，而无抗体传代组优势准种在种群中的比例在下降。该研究显示野毒株SD0612 是由多个准种组成的种群，抗体的选择压能够显著减少PRRSV的准种多样性，并可能使某些准种通过基因突变演变为新的优 势准种。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；抗体选择压；准种多样性；ORF5；ORF6 and 猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiverespiratory and 综合征病毒(Porcinereproductiverespiratorysyndrome 发生严重繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高病死率为特征的烈性传染病。本病自报道以来已遍及世界各 主要养猪国家和地区并给全球的养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV基因组包含有8个开放阅读框(ORFs)， 其中ORF5所编码的GP5蛋白被认为是最重要的抗原性蛋白之一，在自然界中变异最快，成为研究PRRSV 变异和进化最主要的参考依据[I-3]。 基缺失为主要分子特征的高致病性变异强毒株，该变异株在极短的时间内即传播到国内主要养猪地区并造 成了大流行。然而病毒的分离鉴定显示该时期内分离株ORF5基因虽高度同源但也有轻微差异[4-617推测这 极有可能是以NSP2缺失为主要分子特征的PRRSV变种受不同因素筛选出的优势准种在不同地区的表现。这 些因素可能多种多样，其中抗体选择压是近年来广为关注的重要因素之一。 已有研究表明，某些病毒在抗体选择压下会发生基因变异并能导致其抗原性的改变，某些非优势准种 通过基因突变后能够躲避机体的免疫系统逐渐演化为优势准种‘¨。这种选择压作用也已通过我们前期创建 的很多实验模型得到验证，如J亚型禽白血病病毒[81H9N2亚型禽流感病毒阳1、新城疫病毒n叫等在抗体选 择压下均发生了有规律的基因变异。作为具有抗体依赖性增强作用的PRRSVn¨，适量抗体与病毒的共存产 生的抗体选择压很可能是导致PRRSV基因变异及其准种多样性演化的重要因素之一。本研究试图以不同 Porcine and PathogenicReproductiveRespiratorySyndrome 抗体选择压下的演变规律。 1材料与方法 1．1 NO：GU233504)， 体阴性猪后死亡率可达100％，为高致病性变异强毒株n2。。其ORF5全长为603bp(GenBank ·——572—— TCID50。 X 肉接种上述病毒2 104TCID。。。分别于攻毒后35天和42天前腔静脉采血分离血清，血清以0．22um一次性 滤器(Millipore，USA)过滤除菌，将血清分装至1．5ⅡIL 验，分别测定各血清的中和抗体效价，取其中效价最高者用于本次实验。 的维持液， 血清，于换液后12，24，36，48，72，96，120 体和FITC标记的兔抗猪抗体为第二抗体进行间接免疫荧光(IFA)试验确定病毒感染。上述过程重复3次， 以病毒复制得到显著抑制但可以继续复制的抗体浓度作为本次实验的最适血清添加浓度。 3个 平行的传代系列；系列II培养液中添加适当比例的抗SD0612猪血清，分为D，E，F3个平行的传代系列。 待细胞75％～80％出现病变时收获病毒分装冻存于一80。C。按上述分组对应接种下一个六孔板，依次传代