永生化山羊滋养层细胞系的建立和其生物学特性分析.pdfVIP

２０１３ 年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会 暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会论文集 永生化山羊滋养层细胞系的建立及其生物学特性分析 董峰，黄勇，赵晓民，杜谦，童德文∗ （西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 ７１２１００） 摘要：滋养层细胞在胚胎着床和胎盘形成过程中发挥重要作用，很多致病因素能够引起滋养层细胞的功能紊乱导致胚胎着 床失败或流产，获得一株能够稳定传代的山羊滋养层细胞用于体外研究具有十分重要的意义。 本研究分离、纯化原代山羊 滋养层细胞，转染携带有ｈＴＥＲＴ基因的质粒永生化原代细胞，并进行传代培养。 结果显示，ｈＴＥＲＴ转染的山羊滋养层细胞 （ｈＴＥＲＴ⁃ＧＴＣｓ）能够持续表达端粒酶基因并且呈现出高的端粒酶活性，连续增殖到５０代而不表现出衰老迹象。 永生化的 山羊滋养层细胞能够特异性表达细胞角蛋白７（ＣＫ⁃７），分泌绒毛膜促性腺激素β亚基（ＣＧ⁃β）和胎盘催乳素（ＰＬ）。 进一步 研究发现，永生化的山羊滋养层细胞可以表达波形蛋白和非经典的组织相容性一类抗原（ＭＨＣ⁃Ⅰ），同时呈现出侵袭性，说 明永生化的细胞为绒毛外滋养层细胞。 永生化的山羊滋养层细胞系不表现出肿瘤转化特性。 本研究通过转染ｈＴＥＲＴ基因 永生化的山羊绒毛外滋养层细胞保持了原代滋养层细胞的生物学特征，可以作为后续研究的试验模型。 关键词：细胞永生化；滋养层细胞；人端粒酶逆转录酶基因（ｈＴＥＲＴ）；山羊 Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄｇｏａｔ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｆｅｎｇ Ｄｏｎｇ，Ｙｏｎｇ Ｈｕａｎｇ，Ｘｉａｏｍｉｎ Ｚｈａｏ，Ｑｉａｎ Ｄｕ，Ｄｅｗｅｎ Ｔｏｎｇ∗ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ７１２１００，ＰＲ Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｓｐｌａｙｖｉｔａｌｒｏｌｅｓｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｅｓｏｆ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎａｎｄｐｌａｃｅｎｔａｔｉｏｎ Ｍａｎｙｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒｓｃａｎ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｍａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ，ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｆａｉｌｕｒｅｏｒ ｅａｒｌｙ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｌｏｓｓ Ｉｔ ｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ａｎ ｇｏａｔ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｗｉｔｈ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｌｉｆｅｓｐａｎ ｉｎｖｉｔｒｏ Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｐｒｉｍａｒｙ ｇｏａｔ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｔｈｅｎ， ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｌａｓｍｉｄ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ （ｈＴＥＲＴ） ｇｅｎｅ ｈＴＥＲＴ⁃ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｇｏａｔｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｓ （ｈＴＥＲＴ⁃ＧＴＣｓ）ｃｏｕｌｄｓｔｅａｄｉｌｙｅｘｐｒｅｓｓｈＴＥＲＴｇｅｎｅａｎｄｅｘｈｉｂｉｔｈｉｇｈｅｒｔｅ⁃ ｌｏｍｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｌｙ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｗｉｔｈｏｕｔ ａｎｙ ｓｉｇｎｓ ｏｆ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ｕｐ ｔｏ ５０ ｐａｓｓａｇｅｓ Ｔｈｅ ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ ｇｏａｔ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｓｔｉｌｌ ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｒｉｍａｒｙ ｇｏａｔ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ ７ （ＣＫ⁃７） ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ β⁃ｓｕ