等双轴静态拉伸原代肺Ⅱ型上皮细胞的形态学改变及机制的探讨.pdfVIP

中国力学学会学术大会2009 （CCTAM2009 ） 等双轴静态拉伸原代肺 II 型上皮细胞的 形态学改变及机制的探讨1) * * ** * * ** ** ** 2) ** * 刘晓阳 詹庆元 叶寰 任雁宏 桑晨 杨春 王辰 * （北京朝阳医院，北京100020） ** （清华大学航天航空学院，100084） 摘要 肺泡 II 型上皮细胞在呼吸运动过程中承受周期性的机械牵张，高频机械通气条件下，肺泡 II 型上皮细胞处于 类似静态牵张的环境中，其对静态牵张的反应是影响高频通气效果的重要原因之一。因此，明确肺泡 II 型上皮细胞 在静态等双轴牵张刺激下的力学响应及其损伤机制对于为临床提供保护性的通气策略具有重要的理论意义。本文采 用机械牵张装置对原代分离的大鼠肺泡 II 型上皮细胞施加静态牵张，观察肺泡 II 型上皮细胞在力学刺激下形态和功 能上的改变。扫描电镜观察发现原代肺泡 II 型上皮细胞在 37 ％面积变化率（△SA）牵张条件下与 12％△SA 牵张条 件下相比表现出剧烈的形态改变，伴有细胞外缘大量的丝状物突起，呈收缩表现。细胞活性测定表明高强度的牵张 细胞死亡率明显增高但与牵张时间无相关性。与之前报道的人肺癌上皮细胞 A549 相比，在 37%高强度牵张刺激下， 原代细胞的损伤明显高于 A549 ，并仅在较高牵张强度下发生伴随丝状突起物的形变。特异性阻断微丝的装配后，牵 张导致的丝状突起消失，提示这些突起物为细胞的微丝；经无钙培养基处理过的细胞与基质的粘附减弱，且牵张所 致的丝状物明显增多；牵张后细胞的 FAK 核酸水平增高。此外，静态等双轴牵张对肺泡表面活性物质—脂膜的合成 限速酶 CCT α表达有抑制作用，同时牵张也使其上游调控因子Sp1 核酸水平下降。上述实验结果提示：细胞的粘附 性与牵张所致的丝状物及细胞的存活率有内在联系。我们推断细胞的剧烈回缩可降低细胞内牵张所致的损伤，该过 程与细胞内粘着斑的快速组装有关。静态等双轴牵张可导致细胞表面活性物质合成的下降，其上游信号通路及与细 胞粘附的关系值得深入研究。 关键词 静态牵张，原代肺泡 II 型上皮细胞，FAK ，A549 ，钙离子，CCT α 引 言 肺组织属于力学器官,机械牵张是其基本受力形式之一。生理水平的机械牵张有利于肺组织细胞 存活、增殖、分化和功能维持[1-2]，但非生理的过度机械牵张则是导致肺损伤的一种非常重要的力 学因素，如在正压机械通气时给予病人较高平台压、肺复张压力和较大的潮气量等条件下，均可能 造成肺损伤（ventilator induced lung injury ）[3]。有关机械牵张所致肺损伤的发生机理尚不清楚，随 着研究的深入发现肺泡II 型上皮细胞力学信号转导(mechanotransduction)是引起细胞早期形态功能改 变的主要因素[4]。当细胞受到外界过度机械刺激后会激活胞内某些信号通路，继而引发细胞内一系 列生化或分子生物学改变，导致细胞形态功能的改变。因此，肺泡上皮细胞对牵张刺激下的力学响 应值得我们进行更深入的研究，亦有助于我们为临床提供保护性机械通气策略。 1 试验方法和试验方案 1.1 原代肺泡 II 型上皮细胞分离培养及鉴定 采用雄性SD大鼠（150~180 克），麻醉后消毒，行气管插管术，腹主动脉放血后行无菌开胸，灌 洗肺内血管至肺苍白后迅速离体心肺及气管，灌洗肺泡后向肺泡内灌入 800μg/ml弹性蛋白酶消化液 1) 国家“973 ”高科技项目(2009CB522108) ，国家自然科学基金 资助 2) E-mail: yangchun@tsinghua.edu.cn 标志* 为第一作者，**为通迅作者 中国力学学会学术大会2009 （CCTAM2009 ） （上海生工），37℃水浴消化 20 分钟后快速剪碎肺组织，100 目、300 目滤网顺序过滤，IgG纯化分 6cells/cm2 将细胞接种于I型胶原