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沪州医学院学报 　　2004 年 　　第 27 卷 　第 6 期 500 Journal of Luzhou Medical College 　Vol. 27 　No. 6 　2004 几种蛋白质含量测定方法的比较研究 甘 　淋 ,李 　娟 ,何 　涛 ,李 　洪1 ( 1 生物化学教研室 ,四川泸州 　646000) 泸州医学院 :分子生物学实验室 ; 　 　　摘 　要 　目的:为培养的肝细胞及神经元蛋白质含量测定选择最佳方案。方法 :采用三种较为常用的蛋白质 含量测定方法 :Bradford 、Lowry 和 Bio - rad DC 法分别对培养的小鼠肝细胞、神经元细胞的全细胞蛋白质提取样品进 行测定 ,并对结果进行比较。结果 :蛋白质含量测定及重复性实验对比分析可见 ,用 Bradford 、Lowry 和 Bio - rad DC 法测定肝细胞蛋白质样品 ,结果均较稳定 ;测定神经元蛋白质样品 ,Bradford 和 Bio - rad DC 法较稳定 ,Lowry 法不稳 定。结论 :肝细胞蛋白含量测定宜采用 Bradford 法 ,神经元蛋白含量测定宜采用改良 Bio - rad DC 法。 关键词 　细胞裂解 ;蛋白质含量测定 ;Bradford 法 ;Lowry 法 ;Bio - rad DC 法 ( ) 中图分类号 　Q51 　　　　　文献标识码 　A 　　　　　文章编号 　1000 - 2669 2004 6 - 0500 - 03 　　双向电泳是蛋白质组研究的核心技术 ,而蛋白 CHAPS、标准蛋白、尿素、酚试剂、TBP 、Bio - 质样品的制备及蛋白质含量的测定则是双向电泳的 lyte 、Bio - rad DC 蛋白测定试剂盒 ,为 Bio - rad 公司 基础。在双向电泳之前必须对蛋白质含量进行测定 产品 ;考马斯亮蓝 G- 250 为 SIGMA 公司产品。 以确定蛋白质的上样量,如果测定结果不精确会对 1. 2 　溶液配制 蛋白质电泳造成相当大的影响 ,这些影响主要有 ① 1. 2. 1 　细胞裂解液 测定结果偏大会出现蛋白质取量不足 , 电泳分离后 4 %CHAPS ,8M Urea ,1 %TBP ,0. 5 %Bio - lyte , 由 低丰度蛋白质不能显现 ; ②测定结果偏小会出现蛋 纯水配置而成。 白质取量过多, 电泳图谱中斑点重叠,分辨率下降。 1. 2. 2 　固定液 因此 ,蛋白质含量测定是蛋白质组分析中一项基本 50 %甲醇,10 %乙酸 ,40 %蒸馏水。 而重要的环节。 1. 2. 3 　显色液 由于不同组织、不同细胞中的蛋白质具有明显 0. 25 %考马斯亮蓝 G - 250 , 由固定液配置而 的差异性 ,它们对蛋白质含量测定方法也各有不同 成。 的要求。针对不同的组织细胞如何选择一种适合、 1. 2. 4 　标准蛋白液 简便、快速、灵敏的蛋白质含量测定方法就成为首先 用细胞裂解液将标准蛋白配制成浓度为 5mg 要解决的问题。目前蛋