日良镜蛇毒细胞毒素的生物素一抗生物素蛋白一酶联免疫吸附检测.pdfVIP

／ B1BLID：ISSN 0253—9756 中国药理学报 Acta Pharmacologica Sinica 1992 Mar； 13(2)：189-192 1 一fq 日良镜蛇毒细胞毒素的生物素一抗生物素蛋白一酶联免疫吸附检测 — !!墨于 三 刘广芬 (福建医学院蛇毒研究室，~l350004，中国) ,gz、7 forcytotoxlnImrifiedfrom cobra 物素 (biotin)抗生物素蛋白(avidin)放大系统 ， 以聚苯乙烯微量反应板为固相载体，建立了一 种高灵敏度的眼镜蛇毒细胞毒素的生物素—抗 GUt Mu-Ping， WANG Qing—Chuan LIU Guang—Fen (LaboratoryofSnakeVenom Research， 生 物 素 蛋 白一酶 联 免 疫 吸 附检 测 方 法 FufianMedkalCollege，Fuzhou350004，China) fB—A—ELJSA) 本文报告方法的建立和检测 效果． ABST队 CT A technique combining the biotin-avidin ampli如ing $)~stem 研 Ih sandwich MATERIAI5 AND METHoDS enzyme-linked immunosorbentassayrB—A—ELISA1 wasdevelopde forthemicroassay ofthe cytotoxin 中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒，产地广 from Naja Ⅱm alravenom Thehorse-peroxidase was nsed as hte marker and polystyrene micro- 西 ． SP-Sephadex C-50， SP-Sephadex hemaggIutinationplatesassolidcarrier．Thesensitiv． C-25， CNBr活 化 Sepharose4B均 购 白 itywas05ng ·mr’．TheassayrangewasI25-37。 Pharmacia公司，酯化生物素，辣根过氧化物 ngm!。。 svlth coefficient of vatsation of 4．9％ 酶标记抗生物素蛋I~(Av-HRP)，精制抗眼镜 (intragronp)and8．1％ (intergroups)．respcetively 蛇毒血清，均为上海生物制 品研究所产品． KEY WORDS cobra venoms；cytotoxins；biotin； 邻苯二胺(OPD)及其它试剂为国产品AR．55 avidin；enzyme—linkedimmunosorbentassay 孔聚苯乙烯微量反应板，GXM一201型酶标光 提要 用夹心酶联免疫吸附检测技术，以辣根过氧化 度计，四川1分析仪器厂产品． 物酶为标记酶 ，结台生物素一抗生物素蛋 白放大系 CTX 的分离纯化和生物活性测定 用 统，以聚苯乙烯微量反应扳为 固相载体，建立一种眼 SP—SephadexC一5O柱层析分离粗毒．分离所 镜蛇毒细胞毒素的微量检测方法：生物素抗生物素蛋 白—酶联免疫吸附测定，灵敏度 O5ng ml，工作范 得细胞毒组分再经 SP—SephadexC-25柱层所 围 I-320ng mrl，组 内和蛆 间变异 系数分别为 纯化0)．用双向免疫扩散和 SDS法鉴 4．9‰和 8．I％