氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响.pdfVIP

维普资讯 第 43卷 增 刊 厦门大学学报 (自然科学版) Vo1．43 Sup． 2004年 8月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) Aug．2004 文章编号 ：0438—0479(2004)8-008—04 氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响 林丽蓉，廖金花，陈清西 (厦 门大学生命科学学院 细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室 ．福建 厦f-1361005) 摘要 ：选用L—Ala、L—Val、L—Leu等 15种氨基酸为效应物．研究它们对杂色鲍 (Haliotisdiversicolor)碱性磷酸酶 (EC．3．1．3，1)催化 pNPP水解反应 的影响．结果表 明；上述这些氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶均有一定程度 的抑制作 用 ．抑制程度随着试剂浓度增 大而 加剧 ．当浓度为 10，0mmol／L时，分别可 以使酶活力下降：7．77 、36，75 、 22．79 、39，86 、16，16 、19．33 、94，77 、20．19 、17，O2 、40．15 、31．08 、17，52 、3O．56 、36．77 和 12．59 ，尤其 以L—Cys对酶的抑制作用最为显著(抑制率为 94．77 )．其次是 L—Ile和 L—His．它们均能使酶活力下 降4O ；对酶抑制率在 3O 以上的氨基酸还有 L—Val、L—Trp、L—Phe和 L—Lys．其它选用 的氨基酸对酶的抑制率小于 25 ．选择对杂色鲍 ALP具有较明显的抑制作用的氨基酸 L—Val、L—Ile、L—Trp和 L—Cys等氨基酸为研究对象．研究 它们对酶催化 pNPP水解反应的抑制作用机理．并测定其抑制常数，结果表明L—Cys的抑制作用为混合型效应．其 KI和 KIs值分别为 0．042mmol／L和 0，139mmol／L；而 L—Val、L—Ile、L—Trp为反竞争性．其 KIs分别为 9．56、8．55、 8．09mmol／L， 关键词：鲍鱼碱性磷酸酶；氨基酸；抑制作用机理 中图分类号 ：Q356．1 文献标识码 ：A 碱性磷酸酶 (ALP，EC．3．1．3．1)是一种膜结合 1 材料与方法 蛋白，在生物体内直接参与磷酸基 团的转移和代谢 的生理过程 ，它与海水中磷质与钙质的吸取 、磷酸钙 对一硝基苯磷酸二钠 (pNPP)为德 国 E．Merck 的生成 、甲壳素的形成和分泌直接相关．目前我国学 产品；各种氨基酸及其余试剂均为国产分析纯试剂， 者已对 多种 贝类 的ALP进行 了研究口]，对鲍鱼 使用的蒸馏水为玻璃重蒸水．鲍鱼ALP酶制剂参考 ALP的研究还处于空 白．我们在对鲍鱼 ALP分离 文献[1]制备，经 Tris—HCI缓冲液 (pH 7．5，含 0．1 纯化和研究部分酶学性质的基础上，进一步研究各 mol／LNaCI)抽提、正丁醇处理 、硫酸铵分级沉淀分 种氨基酸对酶活力的影响，探讨对酶有较强抑制作 离、DEAE一纤维素离子交换 、葡聚糖凝胶分子筛和 用 的氨基酸对酶 的抑制作用机理．该研究对深入探 再次的DEAE一纤维素离子交换柱层析纯化，得到电 讨该酶的催化作用机理 、酶的结构与功能、酶活力 的