柱后衍生一荧光检测高效液相色谱法快速测定鲜牛奶中链霉素残留量.pdfVIP

维普资讯 第2l卷第 l期 分 子 科 学 学 报 VoL2lNO．1 2005年2月 JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCE February2005 [文章编号]1000—9035(2005)01—0020—05 柱后衍生一荧光检测高效液相色谱法 快速测定鲜牛奶中链霉素残留量 姜 莉 ，赵守成 (1．沈阳出入境检验检疫局，辽宁 沈阳 110016； 2．东北大学资源与土木：r-oN学院辽宁 沈阳 11000~．) [摘 要] 牛奶样品经磷酸溶液提取，提取液用苯磺酸阳离子交换柱和C 固 相萃取柱净化，链霉素残留液用甲醇从C 固相萃取柱上洗脱，经旋转蒸发器减 压蒸干，残渣用0．01mol／L庚烷磺酸钠溶液溶解，用柱后衍生一高效液相色谱荧 光检测器在激发波长 263nm和发射波长 435nm测定．方法线性范围为 0．01～O．10mg／kg；在0．01～0．10mg／kg范围，三个添加水平的回收率为 78．3 ～8O．2％，变 异 系数 (CV)为 7．496／～ 12．4 ，方法检 出 限为 0．005mg／kg． [关键词] 牛奶；链霉素；固相萃取；柱后衍生；高效液相色谱 [中图分类号] 0614 [学科代码] 150·45 [文献标识码] A 链霉素是氨基糖苷类抗生素，常用来防治奶牛的腐蹄病[1]．为了保证人类健康，世界 各国对其在牛奶中的残留均规定了限量要求。有关测定牛奶中链霉素残留方法未见报道， 1994年Gerhardt等人L2采用阳离子固相萃取柱净化样品，柱后衍生液相色谱荧光检测 法，测定了动物组织中链霉素和二氢链霉素残留．1995年Usleber等人L3提出了用酶联 免疫化学方法测定蜂蜜中链霉素残留．1996年Ulrike等人 ]开发了用阳离子交换柱和 Cs固相萃取柱净化蜂蜜样品，柱后衍生高效液相色谱荧光法测定蜂蜜中链霉素残留的方 法．本文对分析条件进行了对比实验，确定了磷酸溶液提取、苯磺酸阳离子交换柱和C 固相萃取柱净化、柱后衍生荧光检测器检测的最佳条件，从而提高了方法的净化效果和回 收率，使其更适用牛奶中链霉素含量的检测．完成一次分析只需2～3h．与酶联免疫法相 比，酶联免疫法为半定量方法，受基质干扰影响大，且重复性差． [收稿日期] 2004—05—17 [基金项目] 国家 自然科学基金资助项 目 [作者简介] 姜 莉(1966一)，女，博士研究生，高级工程师，主要从事食品检验工作． 维普资讯 第1期 姜 莉等：柱后衍生一荧光检测高效液相色谱法快速测定鲜牛奶中链霉素残留量 21 1 实验部分 1．1 试剂和材料 甲醇、乙腈、庚烷磺酸钠(CH。NaO。S·H。O)，色谱纯．正己烷、乙酸、磷酸、磷酸氢二 钾、磷酸二氢钾、氢氧化钠为优级纯．1，2萘醌一4一磺酸钠：95 ．叔丁基甲醚：99 ．链霉 索标准品：纯度≥95 ． 链霉素标准储备溶液：准确称取适量链霉素标准品，用水配成 100~／g／mL的标准储 备液，于4℃冰箱储存．根据实验需要，用0．01mol／L庚烷磺酸钠溶液稀释成适当浓度的 标准工作溶液． 阳离子交换柱：BAKERBONDspeTM苯磺酸型阳离子交换柱 (500mg，3mL，美国 J．T．Baker公司)． C18固相萃取柱：BAKERBONDspeTM(500mg，3mL，美国J．T．Baker公司)． 1。2 仪器和设备 1．2．1 液相色谱系统 液相色谱输液泵(Waters510型)；荧光检测器(Waters474型)； 柱温箱及温度控制器(Waters)；数据处理系统(Waters745)． 1．2．2 色谱条件 色谱柱：150mm×4．6mm ，内径 5 m，HypersilCl8柱；流动相： 1．10g庚烷磺酸钠和0．052gl，2一萘醌一4一磺酸钠溶于500mL乙腈一水混合液( ： = 27：73