植物染色体改良AG法G显带技术及其应用S一.pdfVIP

第 18卷第 2期 怀化师专学报 Vd．18 0．2 1999年 4月 JOURNALOFHUAIHUATEACHERS CO EGE Apt 1999 植物染色体改 良ASG法 G一显带技术及其应用 余朝 文 (生物 系 副教授 ) 宋运 淳 (武汉大学生命 科学学院 武 昌 430072) 0带技术 由Stmmex等… (1971)首先提出，其后广泛应用于人类和动物的染色体研究．但植物染色体 的0带技 术产生较 晚．早期用胰酶 法和尿素 法诱导都 只产生 了 G带而投有 产生 0带 Greilhuber (]977) 认为植物染色体 比脊椎动物染色捧收缩程度更高，若不是染色体标本制备方法不当，便是植物界 根车就不存在 0带 ．但有人证明植物的棱 DNA与染色体长度之 比和脊椎动物的并无多太差别 ，因此不能显 0带的原因应是染色体标本制备方法和显带方法不当．由于改用了酶解去壁火焰干燥法制片， 自1982年 起，不同的作者用不屙的方法在许多植物染色体显出了0带 ．归纳起来 ，在植物染色体诱导0带成功 的方法有改良ASC法 、胰酶法 、屎素法、放线菌素 D醋酸地衣红法 、SDS法 、NaOH法、NaIfC吗法等，其 中改 良ASG法” 自产生后 已得到较广泛而持久的应用 ．用此方法 已在裸子植物的杉木¨o、被子植物 的禾车 科 “”、十字花科 、豆科 “等 的3O多种植物 中显出了清晰的0带 ．本文介绍此方法 的主要技术环节 ，并 讨论其应用价值 ． 1 改 良ASG法 0显带技术 ASG法 (醋酸／盐／Gierasa=Acefie／SMine／Gieama)“早期用于显示人类和埔乳动物的0带，此方法的基本 程序是：染色体标本经醋酸处理，2XSSC盐溶液保温，晟后Giea~a染色．此方法也用来显示植物染色体的 C一带：根尖置于45％醋酸软化，45％醋酸压片，2XSSC处理，Cienr,a染色 植物染色体 0显带的改 良ASG 法的技术流程是 ：根尖预处理一前低渗一 固定一水洗一酶解 (一后低渗)一再固定一火焰干燥法制片一 2XSSC处理~Giemsa染色 ．现就各环节的技术要领和原理分述如下 ． 1．1 材料的预处理 其原理与常规染色搏研究中的预处理一样 ．但 0显带 中，通过颈处理既要使染色体缩短和分散 ，叉不 能使同一染色体的两个染色单体产生较大张角 (这会影响带纹的对称性)，因此一般不选用秋水仙碱 ，而是 选用 a一涣萘 (最常用)、8-羟喹啉、对二氯苯 ．对于有些材料 (如小麦属 、山羊草属植物)用 滨萘和对二 氯苯 (11)混台液处理效果更佳 ．在～定温度下，不 同的材料预处理的时间不 同 (表 1)，一般是大染色 体材料预处理时间长 ，小染色体材料预处理时间短 ，染色体很 小的植物可不进行预处理 ．某种材料的具体 预处理时问应通过试验来确定 表 1 一些材料改良ASG法 0显带流程几个环节的比较 材 料 预处理 固 定 酶 辑 Gienm 染色 玉米【廿．溴萘I25 ，J、时言 钟’再巩3驯、时 p2H56℃．,404分0钟： 固定过 夜 ，再 固 25— 35℃ ，3— 5 小时 p肿 ．0，50：1，5小 水稻 无 定过夜 时 野生稻m 溴萘 ，25c【，1小时 是嚣夜’再周。。E,5-6，j、时 。。瑚 小 姚 ，佗 小 固 25~ 3-4州 仉 小