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细胞生物学综述 植物激素脱落酸的质膜受体——一种 G 蛋白偶联受体 生物科学专业 邱爽 本次小综述,我选择的是最近发表在 Science 上的三篇文章,其中第一篇的题目为 ” A G Protein-Coupled Receptor Is a Plasma Membrane Receptor for the Plant Hormone Abscisic Acid”, 第二篇是对第一篇文章中提出观点的质疑,第三篇文章则是第一篇文章 的作者对于第二篇文章中提出的质疑作出的进一步解释和证实。 A G Protein-Coupled Receptor Is a Plasma Membrane Receptor for the Plant Hormone Abscisic Acid 在这篇文章中，作者 Liu. et al. 指出 G 蛋白偶联受体介导的信号通路在动物的视觉、 味觉和嗅觉中占有至关重要的地位，但是在高等植物拟南芥中只有一种假定的 G 蛋白偶联受 体 GCR1 被确定，并且只有一个规范化的 Gа亚基、一个 Gβ亚基和两个 Gγ亚基，这些亚基 的重要性也很少为人们所知。为了确定拟南芥中以前没有被确定的 G 蛋白偶联受体，作者通 过在 Genbank 中搜索拟南芥基因组，发现了一个基因编码假定的 G 蛋白偶联受体 GCR2。作 者通过以下几个实验证明GCR2是ABA的一个质膜受体且GCR2的目标蛋白是异三聚体G蛋白， 即 GCR2 是存在于质膜上的 ABA 的G蛋白偶联受体。 1．跨膜结构的预测表明 GCR2 是一个有 7 次跨膜螺旋结构的膜蛋白，随后的在转基因植物的 根细胞定位分析中证实了 GCR2 有质膜上的定位。显示黄色荧光的 GCR2 蛋白在 GCR2-YFP 转基因植物的膜部分被观察到。GCR2 与 GCR1 一样,都和膜的部分有联系，而且在用洗涤 剂和较高的 PH 缓冲液清洗后，GCR2 仍然保留在膜部分，表明 GCR2 是一个与膜整合的蛋 白。 2．G 蛋白偶联受体的一个特征就是能与 G 蛋白相互作用形成一个复合体，作者通过四个不 同的途径去考察他们的相互作用。 ① 采用表面等离子体共振谱去调查 GCR2 和GPA1（Gа）的相互作用，作者在细菌中表 达和纯化GCR2和GPA1蛋白的重组子，这种体外试验清楚显示GPA1能与GCR2结合， 而GPA1不能与牛血清白蛋白（BSA）结合。GPA1和GCR2的分离结合常数是2.1*10-9M. ② 采用分体式泛素系统去观察酵母中 GCR2-GPA1 的相互作用，证明了已报导的完整长 度的 GCR1 和GPA1 相互作用，同时完整长度的 GCR2 和GPA1 也有相互作用。这种作 用当受体 C末端被泛素片断融合时消失，作者还发现 GCR2的 C 端能与GPA1 相互作 用，但 N 端却不能，显示 GCR2 的C端对于与 GAP1 的相互作用是必需的和足够的。 ③ 双分子荧光互补法也被用来观察植物细胞中 GCR2 和GAP1 之间的相互作用。在拟南 芥原生质中 GCR2 和 GPA1 是相互作用的，移除 GCR2 的 C 端会中止这种相互作用， 显示 GCR2 和GPA1 之间的相互作用是特异性的且 GCR2 的C 末端是必需的。 ④ 采用 coimmunoprecipitation 试验证实了它们在体内的相互作用，作者在免疫沉淀 中观察到 GPA1，表明 GCR2 和GPA1 可以相互联系。 以上四种不同的试验方法都支持 GCR2 和GPA1 之间有相互作用和联系。 3． 为了分析拟南芥中 GCR2 的功能，作者在 GCR2 基因位点插入了不同的 DNA，形成了突变 体 ger2-1,ger2-2和 ger2-3. ① 在三种突变体中，通过反转录聚合酶链反应全文分析没有观察到完整的 GCR2，但是 1