菜豆几丁质酶基因转化小麦的研究.pdfVIP

第32卷第2期 东 北 农 业 大 学 学 报 32(2):111--116 2001年6月 JournalofNortheastARnculmralUniversity June2001 文幸拍号 1005-9369 (2001)02-0111-06 菜豆几丁质酶基因转化小麦的研究 刘‘伟华，’李文雄，’刘绵红，’李新玲，2张燕妮，2赵 欣 (1东北农业大学农学跳 黑龙江 哈尔滨 150030,2哈尔浪师范大学生物系 哈尔浪 150080) 摘费 利用农杆菌二元载体转化法和花粉管通迸法，以莱豆几丁质峰基因转化小麦东农7742农 杆菌感染后的愈伤纽织V,(G41830mg·L’筛选5周。经PCR和PCR一Southern杂交检测。有 0.38写的愈伤获得转化.花粉管通道法转化小麦共操作小花385朵，其中有68.30%的小花给实， 胜PCR扣PCR-Southern杂交检洲.获得转基因挂株的转化倾率为。.52叼 关 锐 词:几丁质酶;基因;转化;小麦 中图分类号:S512-1，5336 文献标识码A 质酶基因的水稻植株对立枯丝核菌有明显抗 0 前 言 性。Grison(t)报道。转几丁质酶基因的油菜对 三 种 病 原 真 菌 (Cylindrosporiurn 几丁质酶是以几丁质为底物的水解酶。 concentricum,Phomalingaln,Sclerotinia Broglie等，)〔将莱豆几丁质酶基因转入烟 scierotiorum)具有坑性。Tabei1996年将水 草(e.0，组成型表达的几丁质酶基因对菌核病 稻几丁质酶基因以农杆菌法导入黄瓜，转基 具有抗性。时焦1997年报道[x)，利用农杆菌 因黄瓜增强对Botrytiscinerea的抗性。Ra- 介导法，将来源于一种生物杀虫剂的几丁质 harjol0N几丁质酶基因转化黄瓜获得转基 酶基因 该〔基因兼抑菌及杀虫两种作用)导 因植株，经Western分析证实，转基因植株 入烟草，PCR和Western印迹检测结果表 表达矮牵牛的酸性几丁质酶基因和烟草、菜 明，转基因烟草中有几丁质酶基因和蛋白的 豆的碱性几丁质酶基因。 表达，且转基因烟草具有较高的几丁质酶活 小麦是世界上栽培面积最大的重要粮食 性。Jach,Howie分别将粘质沙雷氏菌几丁质 作物，真菌病如赤霉病，白粉病，根腐病等 醉基因导入烟草(3.0，转基因烟草对立枯丝核 是小麦的重要病害.真菌病害不仅造成小麦 菌抗性显著。Nielsen1994年将甜菜碱性几 减产，而且真菌毒素还危害人类的健康。因 丁质醛基因导入烟草，但转基因植株对烟草 此，如何获得抗真菌病的小麦品种，也成为 尾抱霉无抗性。Terakawa将丝状直菌的几丁 小麦品种改良中最受关注的问题之一。目前， 质醉基因以农杆菌法导入烟草(s)，转基因烟 转基因小麦研究成功的报道大多为报告的转 草对真菌具有抗性。Ding)将昆虫几丁质酶 化0(0_14)。本研究的目的在于，利用基因工程 基因通过农杆菌法导入烟草，转基因烟草对 方法，将与真菌病抗性有关的外源基因导入 蚜生具有一定的抑制作用。Lin(”获得转几丁 小麦，为小麦的杭病分子育种提供基础材料 和理论依据。 收稿日期:2000-0，一19 一112- 东 北 农 业 大 学 学 报 第 32卷 花，套袋隔离至种子成熟。 1 材料与方法 1.4 转墓因检测 1.4.1PCR扩增 以待测样品DNA为模 1.1供试材料