两种猪伪狂犬病活疫苗产品免疫猪抗体消长规律比较.pdfVIP

第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集 两种猪伪狂犬病活疫苗产品免疫猪抗体消长规律比较 杨晓红，吕茂杰，丁旭娜，何召庆*，杨保收，王宏伟 （天津瑞普生物技术股份有限公司，瑞普生物研究院生物制品研究中心，天津空港，300308） 摘 要 本研究用两种不同基因缺失的伪狂犬病毒制备的活疫苗免疫17-21 日龄仔猪，用ELISA 方法检测免疫后猪血 清中的gB 抗体水平变化。结果表明A 组疫苗免疫后7d 抗体即出现阳转，而B 组疫苗抗体阳转出现比A 组要晚，且 A 组疫苗阳转后至实验结束，其抗体水平都高于B 组疫苗。本研究显示A 组疫苗的免疫效果优于B 组疫苗。 关键词 伪狂犬病；活疫苗；抗体消长 猪伪狂犬病（Pseudorabits ，Pr ）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus ，PrV ）引起的一种急性传 染病。成年猪常为隐性感染，母猪表现为流产、产死胎和木乃伊胎及呼吸系统症状，公猪则表现为睾 丸炎和呼吸系统症状。仔猪感染，其死亡率通常为100%[1] 。因而，本病已给我国养猪业造成巨大的经 济损失，严重影响养猪业的发展。目前，控制预防该病主要以免疫接种为主。本文通过比较两种活疫 苗免疫仔猪后抗体水平的变化，分析免疫后抗体的消长规律，以期为免疫接种时疫苗选择及进一步预 防控制该病提供一定的参考。 1 材料方法 1.1 材料 1.1.1 试剂 猪伪狂犬病病毒gB 抗体检测试剂盒购自IDEXX 公司。 1.1.2 疫苗 两种疫苗均为自制疫苗，A 组疫苗毒株为Barth-K61 株，B 组疫苗为某双基因缺失株。 1.1.3 实验动物 17-21 日龄仔猪（PrV 抗体阴性），由瑞普（保定）生物药业有限公司提供。 1.2 方法 1.2.1 疫苗免疫 实验动物分组：A 组疫苗免疫组4 头，B 组疫苗免疫组4 头，对照组2 头，各组分别饲养在不同 的圈舍中。将2 种疫苗分别稀释至105.0TCID50/头份，免疫组动物通过肌肉注射途径接种1 头份疫苗。 1.2.2 待检血清的分离 于免疫后0d，3d，7d ，14d，21d ，28d ，35d，42d ，49d ，56d 分别从前腔静脉采血10ml，置于3 7℃放置30min，3000rpm 离心10min，取上清即为待检血清。 1.2.3 PrV 抗体的检测 按照说明书操作：取出PrV 抗原包被板，平衡至室温；加100µl 2 倍稀释的阴性对照血清至A1 、 B1 孔；加100µl 2 倍稀释的阳性对照血清至C1、D1 孔；加100µl 稀释好的样品至相应的孔，18-25℃ 孵育60min ；弃去孔中液体，用300µl 洗液洗涤3-5 次；加入抗PrV gB 酶标抗体，100µl/孔，18-25℃ 孵育20min ；弃去孔中液体，用300µl 洗液洗涤3-5 次；加入TMB 底物液，100µl/孔，18-25℃孵育1 5min；加入终止液50µl/孔，终止反应；在酶标仪650nm 处测定结果。 结果判定：阴性对照平均值表示为N ，阳性对照平均值表示为P ，样本值表示为S，在N ﹣P 大 于或等于0.300 时判定该实验成立。若S/N 值小于或等于0.60 ，样品为PrV 抗体阳性；若S/N 比值小 于或等于0.70 但大于0.60，该样品为可疑，必须重测；若S/N 比值大于0.70 ，样品则为PrV 抗体阴 性。 2 结果 用猪伪狂犬病病毒gB 抗体检测试剂盒检测2 种疫苗免疫后的猪血清gB 抗体水平，结果见表 1。 阴性对照平均值N 为1.360，阳性对照平均值P 为0.195 ，N ﹣P=1.165 ≧0.300，此实验结果成立。 根据上述ELISA 结果，计算S/N 值，由于S/N 值越小，表示血清抗体水平越高，为便于观察， 取1 ﹣S/N 值的绝对值后绘制如下折线图，见图1： 440 猪的传染病