高通量筛选的检测原理及应用.pdfVIP

维普资讯 高通量筛选的检测原理及应用 刘文尧①，栾新慧 ，赵毅民 (中国人民解放军军事 学科学院 ．物药物研究所 -IL~( 1OO85O) 摘 要：本文综述 r高通 筛选最新愉测技术的原理，包括均_符1分析干¨细胞分析的检测原理及 在微艟分析及高通 筛选中 的应用。均桕分析中应用较多∞有亲合 烁分析 (SPA)、荧光分析(FA)等 ．而荧光分析技术t要包括荧光共振能髓转移 (ER ．荧，匕偏振 (FP)，时间分辨荧光 (1R)以及荧光_什1天谱(FRS)等。细胞分析 要建矗在荧光伶测技术的基础上． 包括第二 信使分析，报告毖 分忻，细胞增殖分忻等。高通 筛选技术的应．}_}{和发艘 ，将会极火的促进新药研究的进程。 关键词：高通 筛选 ：均桕分析 ：细胞分析 药物研究过 lf】，党导化合物的发现恐 ’个极为币要 体积，捉 岛灵敏度 ．均十H牛化分析经常采刚亲台闪烁分析或 的过程 。近年米 ，随替分厂生物学的迅猛发眨殷功能辏 组 荧光检测技术。 下选择运川哪种技术．则往往取决f微分 的|{j现 ，具柯潜在治疗作门{的靶标越来越多．组合化 技术 析靶标的分类靠进行细胞丧而受体结合分析时要经常运用 使化合物库迅速扩大 ，这 促进了高j旦1{lI筛选I：(H1SJfJ功 泶合f^4烁分析技术 ，为受体浓度低 ，所需亲合性高 ，分析要 化 、微}{=『化的迅速发眨 很低的标记探针浓度 进行 ，所以婴_I．}{列此技术 往酶分 l岛通 筛选分析通常在 96孔板 }：进行 ，采 1]『 功化技 析硐I细胞分析 l『1，经常要用剑钙离f，盟其它离 的荧光性酶 术对流体进行分配并对微孔板进行处 ．化 物、药物淅 底物乖II荧)匕指求剂 ，即采用荧光检测技术。 的检测在徽孔扳叶1进行 ，这种分忻模式 令仍被广泛采J{{． 1、1 合闪烁分析 (SPA) 求合f^J烁分析在细胞表面受体 许多研究机构已转lfIJ384孔板歧孔数奠舟、体积更小的分 约物筛选r卜应川较为酱遍 。 高通 筛选测定细胞表面受 析模式 。现今，国外许多制药公州 把l岛趣 {l筛选作为 体亲合结介作用时，放射配体标记滤过分析技术由于需要进 发现先导化合物的 婴手段。 的高迎 筛选模 为每 行分离 ，现L三漩亲合 烁分析所取代 I。米合 烁分析技术 次筛选 1000个化合物Il。趟高通}{={筛选呵每天筛选 10万 通过亲合结合，将放剩陛配 结合到 彳彳受体的闪烁球上， 多个化合物II随着分析容 的增人．分卡斤榆测技术、液体 从 I『_『产『生光子，减少lr]孜射配体怀记分析中的游离配基 结 处理及 自动化 ．还有连续流动以及信息处理 成为制约高趔 合配璀的分离过 ，使得放射 分析可完全以自动化的方 镰筛选发展∞瓶颈I71。凶此，为减少成本和降低操作费 『】『， ℃进行，适于进行高通艟筛选 产，}三低能艟放射粒 的同位 高通 筛选须向自动化、分析微艟化方向发展 ， 索町被用米进行放射性标i己，『 种低能精放射粒子在短距 微 分析可使每次分析时所J}J化台物及化学试制减少． 离内可被蘑I贩1收，以确保 仃结合副受俸表面的配基／r被卡龟 这样可增加高通h℃筛选的容：髓。l叫时，使 zi 处 和多 测到…ISPA技牝被广泛的应__I_【】到激酶I 1、核酸处理酶 种检测方式的 ff】成为可能。进行 效‘ 微 分析通常铂 分析I1以硬受体配体的桕互作用I 1分析中 两种方法 【l：一足采用商密度 、小体积的微孔极 ：一：足设汁¨丁 1．2 荧光分析 荧光榆测方法灵敏足 为多数荧光基团都 进行连续流动分析的微孔板 短暂的半衰卿，即使得用较弱的激发光源也能获得人i}={的 离通艟筛选分析-要包括均丰H分析羊¨细胞分析 ，均干11分 光予流。这种特性以及多干4II采用的荧光模式，使得荧光检 析技术中应 较多的有 合 烁分析(SPA)、荧光分析(FA) 测技术成为高通 筛选必不叫少的 用手段 【l。荧光技术 等技术 。泉台1=j=3烁分析 (