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比色分光光度法 3 3 吸光度读数范围的选择 吸光度范围不同会给测定带来误差 因为A＝?bc A=lg1/T＝－lgT 所以－ lgT＝?bc (1) 将上式微分 －dlgT=－ 0.434dlnT = －0.434dT/T= ?bdc (2) 2÷1 dc/c= (0.434/TlgT) dT ?c/c= (0.434 /TlgT ) ?T ?c/c 浓度的相对误差 ?T 透光度的绝对误差 ?T=0.5% 当吸光度为0.15-1.0时，误差较小为1.4-2.2% 。 若测量的吸光度过低或过高，误差都很大。 所以普通光度法在高含量或极低含量测定时不准确。 吸光光度法的应用 1高含量组份的测定－示差法 2多组份分析 3光度滴定 4酸的离解常数的测定 5 络合物组成及稳定常数的测定 1高含量组份的测定－示差法 若待测组份含量太高，吸光度数值偏离比尔定律。用纯溶剂作参比溶液，测得的吸光度高，引起较大的误差。 示差法可以克服这个缺点 什么是示差法： 首先使用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液，使它的T为100％,A=0。 待测液的透光度比100％小。此时的吸光度为相对吸光度Ar ，此时的透光度为相对透光度Tr 。 若用普通光度法以纯溶剂为参比溶液测得的试液和标准液的吸光度分别为Ax、As,对应的透光度为Tx和Ts。 根据比尔定律： Ax＝ ?bcx Ar＝ Ax－As＝ ?b(cx –cs)=?b?c 可知相对吸光度Ar与?c 成正比。 测定一系列?c已知的标准溶液的相对吸光度Ar ，绘制 Ar -- ?c工作曲线，若测得待测液的相对吸光度，就可得到cx。 因为cx=cs+ ?c Cs已知 举例 试液的透光度为5％，标准溶液的透光度为10％。 使标准溶液的透光度变为100％，则试液的透光度为50％，按比例放大。 为什么？ 试液的吸光度应在0.15－1.00 透光度范围应在10％－70％之间。 不同浓度的标准溶液作参比时对浓度的相对误差的影响 参比溶液的透光度分别为100％、80％、40％、10％。 2多组份分析 当吸收光不重叠时 可选择在波长为?1 、?2时分别测定两种物质的浓度。 在?1 测定x时，y不吸收。 在?2测定y时，x不吸收。 ?x1、?y1 分别为x 和y的纯溶液在?1时的摩尔吸光系数 ?x2、?y2分别为x 和y的纯溶液在?2时的摩尔吸光系数 A1= ?x1bcx+ ?y1bcy A2= ?x2bcx+ ?y2bcy 4个摩尔吸光系数的数值可在x、y为纯溶液时，在两种波长下测得。 两个波长如何选择？ 当两条曲线的吸光度相差较大时选择。 3光度滴定 Bi3＋的溶液对光不吸收 EDTA对光不吸收 Bi3＋和EDTA形成的络合物对光不吸收 Cu2＋和EDTA形成的络合物对光有吸收 4 酸的离解常数的测定 弱酸离解 HL?H＋＋L－ 离解常数Ka=[H＋][L－]/[HL] 配制一系列总浓度相等，而pH不同的溶液 测定pH值。 在酸式和碱式有最大吸收波长处测定溶液 的吸光度。 A＝ ?L－ [L－] ＋ ? HL[HL] 根据分布系数的概念 A＝ ?L－ Ka c/ ([H＋]+Ka )＋ ? HL [H＋] c/ ([H＋]+Ka ) （9－16） 高酸度时， A HL ＝ c ?HL （9－17〕 低酸度时，则A L－ ＝ c ?L－ （9－18） 17、18代入16式中，消去c 如何调整酸度，按照弱酸的分布曲线上酸和它的共轭碱的分布系数为1时的酸度来定。 A＝ AL－ Ka / ([H＋]+Ka )＋ A HL [H＋] / ([H＋]+Ka ) =(AL－ Ka ＋ A HL [H＋]) / ([H＋]+Ka ) Ka= [H＋](A HL - A )/(A - A L -) pKa= pH+lg(A - A L -)/(A HL - A ) pKa= pH+lg/(A - A L -)/(A HL - A ) lg/(A - A L -)/(A HL - A )＝0 看横坐标 pH= pKa 看纵坐标 pH＝0 pKa= lg/(A - A L -)/(A HL - A ) 5 络合物组成及稳定常数的测定 5.1摩尔比的测定 固定金属离子浓度，改变络合剂的浓度，测定一系列吸光度值，以cL/cM为横坐标，以吸光度为纵坐标作图。 当cL/cM?n时，金属离子没有完全络合。 当cL/cM?n时，金属离子几乎完全生成络合物，吸光度不再增加。 两条直线外延线的交点处的横坐标为n，络合物的络合比为1：n。 5.2稳定常数的测定 若