PKCδ在游离脂肪酸诱导内皮细胞凋亡过程中的作用研究.pdfVIP

876 重庆医学 2015年 3月第44卷第 7期 · 论 著 · doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2015．07．004 PKC 在游离脂肪酸诱导 内皮细胞凋亡过程 中的作用研究 杨飞燕 ，陈曼华 ，蔡 威 △ (华中科技大学同济医学院附属武汉 中心医院：1．心 内科 ；2．普外科 ，武汉 430014) [摘要] 目的 探讨蛋 白激酶 c8(PKc8)在游离脂肪酸 (FFAs)诱导内皮细胞凋亡过程中的作用。方法 培养人脐静脉 内 皮细胞 ，分别给予不同浓度 的FFAs刺激 ，转染 PKCasiRNA 以抑制 PKCa的表达。使用比色法检测细胞 的增殖情况 ，采用定量 流式细胞术测定细胞凋亡情况，免疫印迹法检测 PKC8蛋 白及磷酸化蛋 白的表达水平。结果 在人脐静脉 内皮细胞 内FFAs可 产生多种效应 ，包括浓度依赖性的抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加 PKCa的表达和磷酸化等。抑制 PKCamRNA的表达可导 致 FFAs诱导细胞凋亡减 少。结论 PKCa可能介导 内皮细胞 中FFAs诱导 的细胞 凋亡。 [关键词] PKc8；游离脂肪酸；内皮细胞 ；凋亡；siRNA抑制 [中图分类号] R587．2 [文献标识码] A [文章编号] 1671—8348(2015)07—0876—02 Theinvestigation oftheroleofPKC6 in freefattyacid-induced endothelialcellapoptosis Yang Feiyan ．ChenM anhua ．Cai 。 (1．DepartmentofCardiology，theCentralHospitalofWuhan，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityof ScienceandTechnology，Wuhan，Hubei430014，China；2．DepartmentofSurgery，theCentralHospitalofW “n ，TongJi MedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan，Hubei430014，China) [Abstract] 0bjective ToinvestigatetheroleofPKC3infreefattyacid—inducedendothelialcellapoptosis．Methods Inaddi～ tion，welookedforevidenceofapoptosis—relatedPKCasignalpathway．Humanumbilica1veinendothelialcellsweretreatedwithva— riousconcentrationsoffreefattyacidsandtransientlytransfectedwithPKC8siRNA toinhibitPKCaexpression．Cellproliferation wasdeterminedthroughcolorimetricassays，andapoptosiswasquantifiedusingflow cytometry．Proteinexpressionwasdetermined from eelllysatesuseWesternblotswithantibodiesagainstp-PKC6Tyr512，PKC8．Statisticalanalyseswereperformed．Results Freefattyacidshadmultipleeffectsonhumanumbilicalveinendothelialcells。includingconcentration-dependentinhibition ofcell proliferation，inductionofapoptosis，increased Fasexpression，andincreasedPKC艿expression