产脂肪酶重组枯草芽胞杆菌的发酵优化.pdfVIP

第 12卷第4期 生 物 加 工 过 程 Vo1．12No．4 2014年 7月 ChineseJournalofBioproeessEngineering Ju1．2014 doi：10．3969／j．issn．1672-3678．2014．04．001 产脂肪酶重组枯草芽胞杆菌的发酵优化 司冠儒，徐美娟，饶志明 (江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，无锡 214122) 摘 要：笔者所在实验室前期筛选到 1株产脂肪酶粘质沙雷氏茵，克隆其脂肪酶基因，构建重组枯草芽胞杆菌 Bacillussubtilis168／pMA5一lipA，成功实现 了来源于粘质沙雷氏茵的脂肪酶基因在枯草芽胞杆菌中的表达。基于以 上工作基础上，对B．subtilis168／pMA5一lipA进行了摇瓶水平上的产酶发酵优化。首先通过单因素和正交试验确 定了有利于产脂肪酶的最佳培养基成分，并对发酵条件进行 了优化。结果表明：优化后的培养基组分为蔗糖 35 L，玉米浆27．5g／L，(NH4)2SO41．25g／L，CaC124g／L，pH7．0。在最优发酵培养基的条件下，37oC、160r／min 摇床培养33h，每毫升发酵液中重组茵脂肪酶酶活可达98．6U，是优化前的3倍。 关键词 ：枯草芽胞杆茵；发酵；脂肪酶；粘质沙雷氏茵 中图分类号 ：TQ925 文献标志码：A 文章编号 ：1672-3678(2014)40—0001—06 FermentationoptimizationofrecombinantBacillussubtilisproducinglipase SIGuanru，XUMeijuan，RAOZhiming (KeyLaboratoryofIndustrialBiotechnologyoftheMinistryofEducation，JiangnanUniversity，Wuxi214122，China) Abstract：A lipase—productionSerratiamarcescenswasscreenedanditslipasecodinggenewasclonedto constructtherecombinantBacillussubtilis168／pMA5一lipA．Lipasefrom Serratiamarcescenswasexpressed inB．subtilisforthefirsttime．Inthisstudy，fermentationoptimizationofB．subtilis168／pMA5一lipAwas carried outat the shake flask leve1．Medium compositions were optimized using single factor and o~hogonalexperiment．Furthermore，theoptimization ofculture conditionswasperfomr ed．Theoptimal fermentationmediumwasasfollows：sucrose35g／L，cornsyrup27．5g／L，(NH4)2SO41．25g／L，CaC12 4g／L，andpH7．0．Thelipaseyieldreached98．6U／mLintheoptimalfemrentationmediumandculture conditions，itwas3timesbeforetheoptimization． Keywords：Bacillussubtilis；fermentation；lipase；Serratiamarcescens 脂 肪 酶 (1ipase，EC3．1．1．3，triacylglycerol 的性质广泛应用于食 品加工 、生物医药和生物柴 acylhydrolase)，又称三酰基甘油水解酶。能催化水 油等领域 卜。朱绮霞等