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巢蛋白的分子生物学及医学研究新进展 黄婷婷 西南交通大学生物工程学院，四川成都 (611756) E-mail：huang77wangyi@163.com 摘 要：巢蛋白是神经干细胞，胰腺干细胞的标志分子，是中间纤维家族的成员，被列为第 Ⅵ类中间纤维，其结构和分子量与其他的中间纤维成员有差异，巢蛋白基因的第二个内含子 上有两个增强子-- 中脑特异性增强子和泛CNS 增强子。 关键词：巢蛋白，增强子，CNS 中图分类号：Q291 1. 引言： 巢蛋白（nestin ）是中间纤维的一种，被归为第Ⅵ类中间纤维。其氨基酸残基数为 1821， 蛋 白 质 分 子 量 为 240 ， 000 。 巢 蛋 白 具 有 中 间 纤 维 的 一 般 结 构 ： “ 头 部 +1A+L1+1B+L1-2+2A+L2+2B+尾部”其中头部有一个 β-折叠区。[1] 巢蛋白可以作为神经 干细胞的标志蛋白，用于研究神经系统发育方面的问题。 巢蛋白是中间纤维的一种，它的基因有四个外显子，三个内含子。目前已经分离并鉴定 了人类（１９９２）、大鼠（１９９０）和小鼠（２００１）的基因。[2] 巢蛋白基因内 含子大小分别为９６４、１６８７ 、１９４bp ，小鼠的分别为１００３、１６８６、５４ ４；小鼠巢蛋白基因编码的多肽序列与大鼠和人类的相似性分别为8 ４%和６２％。在巢蛋 白基因的头部有一段大约１５００残基的保守序列。小鼠的这一段序列与大鼠和人类的相应 序列的相似性分别为９４％、８１％。[3] 2. 巢蛋白基因的分子结构 巢蛋白基因的第一和第二个内含子分别有一个独立的细胞特异调节因子，分别指导发育 中的肌肉细胞和神经前体细胞的报告基因的表达.调控ＣＮＳ前体细胞表达巢蛋白的增强子 又有两个：一个是调控胚胎大部分神经管的神经前体细胞表达的泛ＣＮＳ增强子（pan CNS enhancer ）;另一个调控胚胎脑神经前体细胞表达的区域特异性增强子— 中脑特异性增强子 （midbrain enhancer ）.[4] 目前对第二个内含子的两个增强子研究较多。这两个增强子在大鼠、小鼠和人类间有很强的 保守性。如，中脑特异性增强子（midbrain enhancer ）的94 个位点就有 71 个是保守的。[5] 巢蛋白的中脑特异性增强子在 1068-1199 位和 1200-1255 中各有一个结合位点分别与 NXR 和 X 因子结合，泛ＣＮＳ增强子在 1272-1400 和 1401-1477 各有一个与 POU 结合的位点， 对于每一个增强子，两个结合位点都是必须的[5]将荧光基因作为标志蛋白整合到载体 ptkEGFP 中，在合适的位置整合上泛CNS 增强子，用 PCR 突变 POU 结合位点发现 POU 结 合位点对于巢蛋白基因的活性的表达是必须的。 在中脑特异性增强子中发现了一个 204bp 的调节元件，它可以与核受体（nuclear receptor ）家族的蛋白结合，调节中脑特异性增强子的活性。[5]。已经用缺失突变的方法证 明，两个增强子不能离开对方而表现出活性。中脑特异性增强子由两个片段组成，一个是中 脑特异性元件，含有 132bp 核苷酸，另一个片段含 72bp 核苷酸。[5] -1- 3. 巢蛋白 的装配方式及其与其他中间纤维的差异。 巢蛋白的预测序列的核心区域与所有其他已知五类中间纤维的相似性为１６％－２９ ％，而同类中间纤维的相似性可以达到５０％，所以它被独立地定为第Ⅵ类中间纤维。另外， 巢蛋白Ｎ端有１１个残基，比其他中间纤维短，而Ｃ端相对较长；其分子量为２４０，００ ０，高于其他所有中间纤维；最后，巢蛋白在组织中的分布也具有特殊性，主要是在未分化 的但具有分化能力的细胞中表达。 巢蛋白的装配必须依赖与其共存的波形蛋白（vimentin,属第Ⅲ类中间纤维）和（或）a –internexin 。有研究显示，在巢蛋白与波形蛋白分子量比例不超过 1：4 的情况下，巢蛋白 就可能与波形蛋白共同组装后整合到细胞骨架