携带新城疫病毒融合蛋白基因的重组减毒单核细胞增多性李斯特菌构建与鉴定.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # !! ’ !% 年 月 日 $%% ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! ()*+ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 携带新城疫病毒融合蛋白基因的重组减毒单核 细胞增多性李斯特菌构建与鉴定 徐晶靓，江玲丽，陈 宁，帅江冰，方维焕 （浙江大学动物预防医学研究所 浙江省动物预防医学重点实验室 杭州 #5%%$6 ） 摘 要：以鸡新城疫病毒 基因（ ）为模式外源基因，通过基因切割 重叠延伸 法（ ）将其插入到 ! FEK40 4 LMN OP74LMN 单核细胞增多性李斯特菌（ ）毒力基因 的启动子和信号肽序列下游，并将该融合片段克隆入 #$%’#( )*+*,-%*.+$ /0- 穿梭质粒QROK, ，随后将重组质粒电转李斯特菌进行同源重组。FEK40 基因的LMN 扩增表明该重组菌构建成功， 结果表明 基因在重组菌中得到了转录。比较了重组菌和野生型菌株的溶血性、黏附和侵袭力、对小鼠和 N-4LMN ! 鸡胚的毒力和生长特性以及重组菌的体内外稳定性，结果表明： 基因中 片段的整合消除了单核细胞增多性李 /0- ! 斯特菌溶血素基因的表达，其培养上清液没有溶血性，而野生型菌株的溶血价达$! ；细胞试验表明重组菌对细胞 的黏附力和相对侵袭力均有不同程度的降低，而相对侵袭力与野生型菌株具有显著性差异（ ）；重组菌对小 1 S % T% 鼠及鸡胚的毒力（ ）与野生型相比分别下降 和 个对数数量级；重组菌在 肉汤和小鼠体内连续 次 UE # T, T VWX % 后，仍然可以扩增出目的基因FEK40，初步表明该重组菌较为稳定。 关键词：单核细胞增多性李斯特菌；同源重组；插入突变；李斯特菌溶血素P 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Y,3 G %%%54$%6 $%% %#4%!!4% 以细胞内感染性细菌如减毒鼠伤寒沙门氏菌 将其作为疫苗载体之前需进行减毒。目前U8 减毒 （ ）和单核细胞增多性李斯特 的方法有两种：一为基于毒力基因的缺失或插入突 2(0)*+00( %-3/#)4’#4) ［ ］ 菌（