荧光定量检测法比较三种提取大豆加工样品方法的优劣.pdfVIP

维普资讯 第9卷 第3期 口 岸 卫 生 控 制 PoRT眦 AITHC0N1R0L ·9 · V01．9 No．3 荧光定量检测法比较三种 提取大豆加工样品方法的优劣 赵卫东 郑文杰 刘 炬 贺 艳 天津出入境检验检疫局(300201) 摘要 运用荧光定量检测的方法，比较 了CTAB法、试剂盒法和 SDS法提取大豆加工样品的优 劣。通过测定其 内源基因Lectin得到的ct值大小比较基因表达水平的高低，通过标准加入法得到 标记基因35s和内源基因LectinCt值的差值ACt值，结合标准曲线，计算出每种混合样品中转基因 成分的百分含量，进而比较这三种提取方法对 PcR反应的抑制程度。总体说来，CTAB法提取大豆 加工样品得到的核酸最适合 PCR反应，其次是试剂盒法，SDS法稍差。 关键词 荧光定量检测 CTAB法 试剂盒法 SDS法 Abstract Threeextrationmethodsforprocessedsamples ofsoybean：CrAB，DNA extrationkitandSDS werecomparedusingfluorescencequantificationdetectionin htispaper．111eCtvaluesofendogenousgene Lectinweredetectedtocomparehtelevelsofgeneexpression．Byaddingastandardreferencetoextractednu— cleicacidoslution．△ CtvaluesofendogenousgeneLectinnadtargetgene35Swereobtained．111epercentage ofgeneticallymodifiedsoybeanwascalculatedby△ Ctvaluesthroughastandardcurve．Furthermore。hteresult canclearlyreflectinhibitivedegreeof山ethreeextrationme山odstoPCR reaction．Ingenera1．nucleicacidex— trated山roughCrABmethod iS山emostsuitableofrPCRreaction．nucleicacidextrated山rouhg DNAextration kitiSbetter．nucleicacidextratedthrouhg SDSmethod isn’tsuitableforPCRreaction． Keywords Fluorescenceuqnatificationdetcetion CrAB DNA extrationkit SDS 随着Taqman技术的日趋成熟，转基因产品检测 适合定量 PeR反应的提取方法。 也逐渐由基于此项技术的荧光定量 PCR检测取代 1 材料与方法 了传统的定性PCR检测方法_5]，特别是近两年欧 盟和美国等一些发达国家不断降低转基因检测阈 1．1 供试样品 值，提 出产 品中转基因成分超过 0．1％就要加帖转 0．1％、0．5％、1．0％、2．0％和 5．0％转基因大豆 基因标识，使得定量PCR检测技术在检验检疫中变 标准核酸样品(英科新创科技有限公司提供)。 得更加重要和必要 1【l，]。但是 目前定量PeR检测 豆片、豆奶粉、腐竹(从超市购得) 应用的大多是生物公司开发的检测试剂盒，检测成 本过高，检测灵敏度也有差别。因此，有必要 自己设 1．2 试剂 计引物、探针，优化提取方法，在不影响检测质量的