A型流感病毒H5N1的M2离子通道稳定细胞株的建立.pdfVIP

牛物 工 程 学报 ChinJBiotech2008，November25；24(111：1902．1906 journals．im．ac．cn ChineseJournalofBiotechnology ISSN 1000—3061 cjb@im．ac．cn @ 2008InstituteofMicrobiology,CASCSM Allrightsresewed , A型流感病毒H5N1的M2离子通道稳定细胞株的建立 孙娟娟1,2李楚芳 ，徐伟。，李志远1,3，刘劲松 ，陈凌1,2 l中国科学院广州生物医药与健康研究院，广州 510663 2中围科学技术大学 医药生物技术系，合肥 230027 3 DepartmentofPharmacologicalandPhysiologicalScienceSaintLouisUniversitySchoolofMedicine，St ， ． Louis，M issouri63104，USA 摘 要：A型流感病毒H5N1的M2离子通道 (H5M2)基因经优化后由人工合成，适合于哺乳动物细胞 中表达。通过酶 切克隆于pcDNA4质粒，并在HEK293细胞中建立稳定细胞株。Westernblotting和免疫荧光证 实H5M2在稳定细胞中 只有在四环素诱导下才能表达，并经膜片钳证实在 HEK293细胞中表达的H5M2具有 H通道活性，为M2离子通道功 能的研究和M2离子通道阻断剂筛选方法的建立提供 了参考。 关键词：流感病毒 ，M2离子通道，四环素诱导 EstablishStableCellLinetoExpressM 2IonChannelof InfluenzaaVirusH5N1 JuanjuanSun ，ChufangLi，WeiXu，ZhiyuanLi，JinsongLiu，andLingChen， 1GuangzhouInstituteo／BiomedicineandHealth，ChineseAcademyofSciences(GlBH)，Guangzhou510663，China 2DepartmentofBiomedicineandBiotechnology，UniversityofScienceandTechnologyofChina，Hefei230027，China 3DepartmentofPharmacologicalandPhysiologicalScience，SaintLouisUniversiytSchoolofMedicine，St．Louis，Missouri63104，USA Abstract：TheM2ionchanne1proteiniSanimportanttargetagainstinfluenzaAvirus．Inthisstudy,H5NlinfluenzaAvirusM2ion channel(H5M2)genewasclonedintopcDNA4vector．TheHEK293stablecelllineexpressingH5M2wassuccessfullyestablished． TheexpressionofH5M2ionchannelproteinwasinducedonlybytetracyclineandconfirmedbyimuunofluorescenceandWestern blot．Theionchannelacti~ityofH5M2wasconfirmedbywholecellpatch—clamprecording．FiftyI．tmolperliteramantadineblocked theH5M2channe1conductancecompletely inHEK293cells．Thisstablecelllin