高产AmpC酶大肠埃希菌ampC基因启动区突变的分析研究.pdfVIP

ofClinical 临床检验杂志2008年第26卷第6期ChineseJournal Science，2008，V01．26，No．6415 Laboratory 文章编号：1001-764X(2008)06-0415-04中图分类号：R446．5 文献标识码：A ·论著· 高产AmpC酶大肠埃希茵ampC基因启动区突变的分 析研究木 邵海枫，王锦娜，王卫萍，史利宁，张小卫，范明(南京军区南京总医院临床中心实验科微生物室，南京210002) 选择三维酶试 摘要：目的分析临床分离的高产AmpC酶大肠埃希茵(最coli)中染色体ampC基因启动区突变状况。方法 验产AmpC酶和／或产ESBLs以及头孢西丁耐药的40株E 动区的片段，启动区扩增产物用MaeⅢ内切酶酶切。参考以上结果，选择部分菌株的启动区扩增产物测序分析。结果40株 4个位点 突变。一42住C卅突变形成了与一35区强启动子相同的6住体序列。结论一42位、一32位和衰减区茎环位点的突变增强 ampC基因的转录。在大肠埃希茵对广谱头孢菌素类药物耐药中起重要作用。 关键词：AmpCl3．内酰胺酶；启动子；衰减子 大肠埃希菌中染色体上的ampC基因操纵子与 ATCC 其他革兰阴性菌不同，缺少调控基因ampR，AmpC 25922。 酶的合成不是诱导型的而是组成型的。染色体上 ampC基因启动子与延胡索酸还原酶(frdABCD)操 纵子中的frdD基因重叠，延胡索酸还原酶操纵子的 转录终止子具有发夹结构，能够消减RNA聚合酶的 3’落在与启动子强弱密切相关的一35区和一10区。 功效，是ampC基因的转录衰减子，在其调控下用以检测这两个区的突变；琼脂糖购自Bioasia公 ampC基因呈低水平表达。但近年来出现了高产司，聚丙烯酰胺购自Sigma公司。 AmpC酶的大肠埃希菌，研究发现，除了质粒携带的 1．3药敏实验微量肉汤稀释法分别检测40株菌 对头孢三嗪、头孢他啶、头孢噻肟、头孢毗肟、哌拉西 ampC基因导入外，染色体上ampC基因启动子、衰 减子或ampC编码区的突变，从其他细菌获得强启彬他唑巴坦、环丙沙星、阿米卡星、氨曲南、亚胺培 动子或携带强启动子的序列插入，从其他细菌获得 南的MIC；对头孢西丁的药敏结果用K—B法测定。 调节基因ampR等因素都有可能导致染色体型 AmpC酶的高产【l引。本文选择我室分离的三维酶质粒携带的ampC基因，按照基因百分相似率分为 MOX、CIT、DHA、ACC、EBC和FOX6个型，6对引物 试验产AmpC酶或头孢西丁耐药的40株大肠埃希 菌，进行ampC基因启动子和衰减子区突变的分析 研究。 1材料与方法 献[4-73。 1．5 5’． 1．1菌株收集2001—2004年各类临床标本中分 ampC启动子基因扩增上游引物Q1—151 离的可疑同时产AmpC酶和ESBLs或单产AmpC酶 120 的40株E．coli。入选表型为生物梅里埃Vitek一32 GNS ESBLs检测卡检测结果为ESBLs阴性，NCCLS段长度271 bp旧J。所有引物均由上海博亚公司合 mmol／L 推荐的K—B法ESBLs