植物无标记转化的诱导表达Cre_loxP重组系统的构建A.pdfVIP

( ) 第 26 卷 　第 1 期 石河子大学学报 自然科学版 Vol . 26 　No . 1 2008 年 2 月 ( ) Feb . 2008 Journal of Shihezi University Natural Science ( ) 文章编号 2008 植物无标记转化的诱导表达 Cre/ loxP 重组系统的构建 段小瑜 , 张录霞 , 马 　超 , 郝青楠 , 马兵钢 (石河子大学农学院 , 新疆石河子 832003) 摘要 : 应用 Cre/ lox P 系统位点专一性重组的特点构建诱导表达的定位重组系统 ,用以特异性的敲除转基因植物的 标记基因。为了获得诱导表达启动子 ,从大豆基因组 DNA 中用 pfu 酶克隆热激蛋白启动子 gmhsp 17. 5 c ,将其克隆 ( ) 到pUC118Hinc Ⅱ载体并测序 。结果表明 ,508nt 的 gmhsp 17. 5 c 与已报道序列 GenBank ,AF544399 比较 ,核苷酸的同 源性为 99 . 8 % 。利用该诱导启动子分别构建了含 gmhsp 17. 5 ccre 基因组件和 gmhsp 17. 5 cgus 基因组的诱导型植物 表达载体 pC23HC 和 pC23HG。此外 1 个含有 lox Pguslox P 组件的组成型植物表达载体 pC23L G 被构建 。通过对 3 个植物表达载体做多重酶切及亚克隆后测序分析表明载体 pC23HC 全长 10947bp ,载体 pC23HG 全长 11396bp ,载体 pC23L G全长 11900bp ,符合预期设计 。一套由pC23HC 和 pC23L G 组成的植物无标记转化的诱导表达 Cre/ lox P 重组 系统被构建 ,为进一步将诱导表达的标记基因删除系统用于植物的无标记转化奠定基础 。 关键词 : Cre/ lox P 定位重组系统 ; 标记基因; 载体构建 ; 热激启动子 中图分类号 :S5654 ; Q782 　　　　文献标识码 : A 　　　　 　　利用现代生物技术与常规育种手段相结合培育 达载体 pC23HC 、pC23HG 和 pC23L G ,组成一套植物 作物新类型已成为现代园艺植物育种的新的世界发 诱导表达位点专一重组系统 ,将用于园艺植物无标 展趋势 。基因工程手段已成功地用于创造作物优异 记遗传转化系统的研究 。本研究的开展为进一步应 新种质 。迄今为止 ,虽然没有研究结果表明选择标记 用此系统研究无性繁殖植物的无标记基因转化奠定 基因影响人类健康或环境安全 ,然而消费者对选择标 基础 。 记基因所产生的广泛担忧引起了生物安全领域的激 1 　材料与方法 烈争论 。选择标记基因方便了植物的遗传转化 ,但在 得到转基因植物后 ,确实是多余的,甚至可能是有害 1. 1 　材料 的[ 1 ,2 ] 。如何在转基因操作中避免选择标记基因已成 ( )