流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建与细胞转染研究.pdfVIP

· 182 · 西部医学 2015年 2月 第 27卷第2期 MedJWestChina，February2015，Vo1．27，No．2 流感病毒多表位核酸疫苗 CTB—Eg的构建 与细胞转染研究* 寇静远 潘兴 李婉 宜 邝玉 周琳琳 杨靖 石新丽 陆顺顺 黄筱钧 邓昭敏 秦臻 王保宁 李明远 (1．四川大学华西基础医学与法 医学 院微生物教研室 ，四川 成都 610041； 2．湖北医药学院微生物学教研 室，湖北 十堰 442000) 【摘要】 目的 设计并构建含分子 内佐剂的流感病毒 多表位核酸疫苗 CTB-Eg，初步研 究其在 HEK293T细胞 中 的转染效率。方法 通过生物信息学软件设计并合成 了含分子 内佐剂的流感病毒多表位基 因CTB-Eg，将其插入真核 载体 pEGFP—C2中，获得 了重组质粒 pEGFP—C2／CTBEg；用脂质体法转染 HEK293T细胞 ，通过荧光显微镜观察和 PCR法检测其转染效率。结果 成功构建 了真核表达质粒 pEGFPC2／CTB-Eg，且该重组质粒 能在 HEK293T细胞 中 瞬时转染，转染效率在 50 ～70 之 间。结论 本研究成功设计 、构建 了CTB-Eg融合基 因，其在 HEK293T细胞 中转 染效率较高，为流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg在小鼠体 内的抗病毒作用研究奠定了坚实基础 。 【关键词】 流感病毒 ；核酸疫苗；多表位基 因；霍乱毒素 B亚单位 【中图分类号】 R l81．2 4 【文献标 志码】 A doi：10．3969／j．issn20l5．02．007 Constructionandtransfectionofamulti-—epitopeDNA vaccineCTB_E·gofinfluenza KOUJing-yuan ，PAN Xing，LIWan-yi，etal (1．DepartmentofMicrobiology，WestChinaSchoolofPreclinicalandForensicMedi~ine，SichuanUniversity，Chengdu610041，C^ina 2．DepartmentojMierobiology，HubeiUniversityofMedicine，Shiyan442000，China) [Abstract] Objective TodesignandconstructtheeukaryoticexpressionvectorofCTB—Egfusiongeneofinfluenza virus，andstudythetransfectionefficiencyofpEGFPC2／CTB-EginHEK293T cells．Methods CTB—Egfusiongene containingCTB (choleratoxinBsubunit)asthemoleculeadjuvantwasdesignedandsynthesized．Theeukaryoticexpres sionvectorofpEGFP—C2／CTBEgwasconstructed．ThecertifiedrecombinantplasmidwastransfectedinHEK293Tcells byLiposomalTransfectionReagent．ThetransfectionefficiencyofCTB-Eggenewasdetectedbyfluorescencemicroscope andPCR．Results ExpressionvectorpEGFP—C2／CTBEgwasconstructedsuccessfully．Therecombinantplasmidcould betransfectedinHEK293T cellsanditstransfectionefficiencycouldreachtO50 一70 ．Concl