mtDNAA3243G点突变小鼠模型的建立及其致病机制探讨.pdfVIP

浙江大学学报(农业与生命科学版) 34(6)：621～628，2008 JournalofZhejiangUniversity(Agrie． LifeSci．) 文章编号 ：1008—9209(2008)06—0621—08 DOI：10．3785／j．issn．1008—9209．2008．06．006 mtDNAA3243G点突变小鼠模型的建立及其致病机制探讨 李继霞，王 钜，刘一农 (首都医科大学 实验动物学系 ，北京 100069) 摘 要 ：利用显微注射线粒体技术建立转人线粒体小 鼠模型，研 究外源突变 mtDNA在不 同组织的分 布及遗传规律 ，探讨 mtDNAA3243G点突变对线粒体功能的影 响．从健康成人及 2型糖尿病患者 (携带 mtDNA3243A—G突变)血液标本 中分离有活性的线粒体 ，将其显微注射至小鼠受精卵，胚胎移植 ，产 出 仔 鼠后利用分子生物学方法检测人 mtDNA及 mtDNAA3243G点突变．获得嵌合体小 鼠后 ，对其空腹 血糖和全血乳酸进行测定，并使用荧光法和 比色法分析 A3243G点突变小鼠重要脏 器组织细胞活性氧 生成量 (ROS)、线粒体复合酶 I和 Ⅳ活力及线粒体 ATP合成活力的变化．研 究结果显示 ：在 1只雌性 (转健康人线粒体)和 2只雄性小 鼠(转患者线粒体)中检 测到人 mtDNA，其 中2只雄性 小 鼠携带 mtDNA3243A—G突变；将嵌和体雌 鼠与野生型 C57BI／6J雄 鼠交配后 ，在 1只后代仔 鼠 中检测到人 mtDNA；人 mtDNA仅在嵌合小鼠的部分组织 中表达 ．在含有 mtDNAA3243G突变的组织 中发现，线粒 体复合酶 I、Ⅳ活力降低 ，ATP合成速率下降，R0s水平升高，说 明A3243G点突变能损伤线粒体正常 功能从而导致疾病的发生．综上所述，本研 究利用显微注射法成功建立 了嵌和小鼠，引入 了致病性 的点 突变，为线粒体 疾病 的研 究提供 了良好 的思路 ． 关 键 词 ：线粒体 ；线粒体 DNA；显微 注射 ；转线粒体 ；转 线粒体 小鼠 中图分类号：Q291 文献标识码 ：A LIJi—xia，WANG Ju，LIU Yinong(DepartmentofLaboratoryAnimalScience．CapitalMedical University，Beijingi00069，China) Creation ofhuman／mouse mitochondrialchimera modelcarrying A3243G mutation and exploring pathogenesisofmtDNAA3243Ginvivo．JournalofZhejiangUniversity (Agric ＆ LifeSci．)，2008，34 (6)：621-628 Abstract：GenerationofchimeramicewithhumanmitochondriacarryingA3243G mutationbymicroinjection techniquecouldprovideanidealmodelforstudyinghow xeno—mitochondrialDNA istransmitted tofol10wing generationsanddistributedinvarioustissuesandexploringtheeffectofA3243G mutationonmitochondria1 functioninvivo．Viablemitochondriafractionatedfrom leukocytesofhealthyadultsandtype2diabetesmel1itus patients(2一DM)carryingA3243G，weremicroinjectedintomousezygotes．Aftertransplantationintorecipient