实时荧光定量分析不同锰处理对甘草SQS1基因表达的影响.pdfVIP

2015年 2月第43卷第 1期 中 医 药 学 报 Vo1．43，No．1，Feb．2015 ActaChineseMedicineandPharmacology ·43 · 实时荧光定量分析不同锰处理对甘草 SQS1基 因表达 的影响 马生军 ，陈翔 ，王文全 ’，“，侯俊玲 ，金燕青 (1．北京中医药大学中药学院，北京 100102；2．新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆 乌鲁木齐830052； 3．中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193； 4．中药材规范化生产教育部工程研究中心，北京 100102) 摘 要：目的：探讨不同浓度的锰处理对甘草鲨稀合成酶 1(squalenesynthetase1，SQS1或SS1)基因相对 表达量的影响。方法：以一年生甘草移栽苗为试验材料，设置 5个锰浓度水平 ，分别为0，1．81，18．1， 36．2和54．3mg／L，利用实时荧光定量PCR(Real—timePCR)方法对甘草SQS1基因的Ct值进行测定并 计算其相对表达量。结果：随着锰处理浓度的增加甘草SQS1基 因的相对表达量呈现先升高后下降的 趋势，在 18．1mg／L浓度处理时达到最大值 为7．90，分别是对照 (Omg／L)，1．81mg／L，36．2mg／L和 54．3m#L处理的1．75，1．37，1．37，2．33倍，且差异极显著(P0．O1)。结论：锰对甘草SQS1基因的表 达具有一定地促进作用，适当质量浓度的锰处理能够显著提高甘草SQS1基因的相对表达量。 关键词：锰 ；甘草；SQS1；相对表达量；实时荧光定量 PCR 中图分类号：R28 文献标识码 ：A 文章编号：1002—2392(2015)01—0043—04 甘草 (Glycyrrhizauralens~Fisch．)是中药中常用 为多种酶的活化剂和重要的氧化还原剂在植物体 内发 的大宗药材之一，具有补脾益气，祛痰止咳，调和诸药 挥着非常重要的生理生化作用 。 目前对锰诱导活 等功效，其主要次生代谢产物甘草酸是经过多个生物 性基因表达方面的研究还较薄弱，在已筛选的数量有 合成步骤才得 以形成的，而每个步骤均受到酶的调 限的编码酶基因中，部分生物学功能已得到确认 【。 控 ¨ j。鲨稀合成酶 1(squalenesynthetase1，SQS1)基 近年来，利用T—DNA插入突变和酵母菌功能互补实 因是甘草酸生物合成途径 中的一个重要基因，与甘草 验在植物中鉴定了多种转运蛋 白基因，这些转运蛋 白 酸生物合成具有密切关系 。甘草酸是 以异戊二烯 部分参与锰的跨膜运输 ]。进一步分析表明，转运蛋 为基本结构单元构建的三萜类化合物，SQS1是植物 甾 白在细胞水平上参与锰 向细胞 内的转运和向不同细胞 醇和三萜化合物生物合成的关键酶，定位于内质网膜， 器 (叶绿体和线粒体等)的释放，以及活性离子在 内膜 催化两分子的法呢酰基二磷酸 (famesyldiphosphate， 区域 (液泡、高尔基体和内质网等)的屏蔽作用，而在 FPP)缩合 生成 甾醇 和三萜类化合 物 的第 1个前 整个植株水平上参与植物对锰的吸收、长距离运输和 体——鲨烯 J。最新的研究表 明根施一定浓度 的锰 在地上部的累积过程 J。 能显著增加甘草药材中甘草酸含量 J。 荧光实时定量 PCR(Real—timequantitativePCR， 锰 (Mn)是植物生长发育必需的微量元素之一，作 Real—timePCR)技术是近年来发展起来的一种新的 核酸微量技术，它实现了RT—PCR反应从定性到定量 收稿 日期 ：2014—05—21 修回 日期 ：2014—06—17 的飞跃。利用 Real—timePCR手段分析不同浓度锰 基金项目：国家公益性(中医药)行业