定量检测转基因植物蛋白Cry1Ac的双抗体夹心ELISA方法建立.pdfVIP

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2014，Vo1．30，No．10 定量检测转基因植物蛋白OrylAc的双抗体夹心 ELlSA方法建立 吕雪飞 ’，周晓萍21满燕 ’，张经华 ，王鹏举 。，刘洋 (1．北京理工大学生命学院，北京 100081)(2．北京市理化分析测试中心，北京 100094) 摘要：以典型且研究较多的抗虫CrylAc基因表达的CrylAc蛋白为检测 目标，制备其单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的单克 隆抗体，在优化抗体纯化方案，获得纯化抗体的基础上，以CrylAc单克隆抗体为包被抗体，以辣根过氧化物酶标记的CrylAb单克隆 抗体为检测抗体，建立了CrylAc蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附分析 (ELISA)检测法，并用于玉米中CrylAc蛋白含量的检测。结 果显示，所建立的双抗体夹心ELISA法稳定性较好，测定变异系数在 3％v：Z内；在 10ngm／l_~200ng／mL的浓度范围内，线性回归方 程为Y=0．0l14x+0。0768(Re=0．9989)，检测限为9．49ngm／L；对玉米样品提取液中Cw1Ac蛋白含量的测定回收率在 102．5％～103％ 范围内。本研究所建立的双抗体夹心ELISA法为玉米中C~IAc蛋白的定量检测提供了有效的手段，可作为一种潜在的检测方法用于 转基因产品的检验检疫中，在出入境检验检疫工作中也有较高的应用价值。 关键词：转基因植物；CrylAc蛋白；ELISA；免疫分析 文章篇号：1673．9078(2014)10—257—262 DOI：10．13982j／m．fst．1673—9078．2014．10．043 Double—-antibodySandwichELISAfortheQuantitativeDetectionof CrylAcProteininTransgenicPlants L、厂Xue．fei，ZHOU Xiao-ping2 ， MANYan，ZHANGJing．hua，wANGPeng-ju，LIUYang (1．SchoolofLifeScience，BeijingInstituteofTechnology,Beijing10008l，China) (2．BeijingCentreforPhysicalandChemicalAnalysis，Beijing100094，China) Abstract：Inthisstudy,CrylAcprotein，encodedbyinsect-resistancegeneCrylAc，wasselectedashtetargetantigennaditsmonoclonal natibodyandhorseradishperoxidaselabelednati—monoclonalantibodywereprepared．Usingoptimizedantibodypurificationtechniques，the purifiedantibodywasobtainednaddouble—natibodysnadwichenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)wasdevelopedfordetectionof CrylAcproteinincorn．CrylAcmonoclonalantibodywasusedasthecoatingantibodynadhorseradishperoxidase—labeledCrylAbmonoclonal natibodywasusedas htedetectionnatibody．TheresultsshowedhtathtenewlydevelopedELISA hadgoodstabilityandthecoefficientof variationWaswithin3％．Intheconcentrationrangeof10~200ngm／L，htelinearregressionequationw