PNRC1剪接变异体的鉴定及其在辅激活核受体介导基因转录功能上的比较.pdfVIP

维普资讯 ISSN lOO7—7626 中国生物化学与分子生物学报 2007年 l2月 CN 11—3870／Q ChineseJoumal ofBiochemistryandMolecularBiol 23(12)：1019～1024 PNRC1剪接变异体 的鉴定及其在辅激活核受体介导 基因转录功能上的比较 王元忠， 李渝萍， 陈 敏， 陈 彬， 陈 健，周度金 (第三军医大学基础 医学部生物化学与分子生物学教研室 ，重庆 400038) 摘要 为分析富含脯氨酸核受体辅调节蛋 白 1(PNRC1)选择性剪接 ，及 比较 PNRC1剪接变异体在 辅激活核受体介导基因转录功能上的差异，在生物信息学方法分析 PNRC1剪接变异体 的基础上， 设计一定的特异性 引物 ，采用 RT．PCR结合克隆测序的方法对这些剪接变异体进行验证 ．利用酵母 双杂交和荧光素酶报告系统实验 ，分析它们与核受体的相互作用及比较 它们在辅激 活核受体介 导 基 因转录功能上的差异．结果显示，生物信息学预测的几个剪接变异体真实存在于人的组织和细胞 系中，这些剪接变异体在 与雌激素受体a(ERa)、类固醇衍生因子 l(SF1)等核受体的相互作用的强 度及辅激活核受体介导基 因转录功能上存在较大的差异 ．研 究提示 ，PNRC1这些剪接变异体在体 内可 能发挥不 同的功能 ． 关键词 富含脯氨酸核受体辅调节蛋白 l(PNRC1)；选择性剪接 ；雌激素受体；类固醇衍生因子 l 中图分类号 Q78 IdentificationandCharacterizationofPNRC1SplicingVariants WANGYuan—Zhong，LIYu—Ping，CHEN Min，CHENBin，CHENJian，ZHOU Du—Jin (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing 400038，China) Abstract To identifyandcharacterizesplicingvariantsofproline—richnuclearreceptorcoregulatorprotein 1 (PNRC1)，wefirstlytestedwhetherPNRC1splicevariantspredictedbyinformaticswerenaturallyoccurringin humantissuesorcelllines，secondly analyzed theirinteractionswith nuclearreceptors such as estrogen receptoralpha(ERa)andsteroidogenicfactor1(SF1)byyeasttwo—hybridassay，andcomparedtheirabilities topotentiatenuclearreceptors ERaorSF1mediatedtranscriptionusing luciferasereportergenesystem ．The resultsshowedthatmostofthePNRC1splicevariantspredictedbybioinformaticswerenaturallyoccurringin humantissuesorcelllines，andtheyhadgreatdifferencesininteractingwithERaorSF1andenhancingthese nuclearreceptors mediatedtranscriptions．TheresultssuggestthatPNRC1splicingvariantsmaye