亮甲酚蓝染色对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响.pdfVIP

中囡宙牧兽医学会动物繁殖学分会第l‘四脯学术研讨会论文集 亮甲酚蓝染色对牛卵母细胞体外成熟及体外受精的影响 乔利敏，李向臣，姚雅馨。刘鹏，跃华，粱素丽，关伟军‘，马月辉‘ 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物遗传资源研究室，北京，lool93 关奠阀牛，卵母细胞，I、rM，体外成熟，亮甲酚蓝染色 引言 卵母细胞作为胚胎体外生产的重要元件，其体外成熟(ⅣM)的质量是影响胚胎体外生产的关键因素之一，直接 影响着卵母细胞的激活、受精及随后的胚胎发育能力。目前，胚胎生物技术研究主要是从屠宰场收集卵巢，由于卵巢 的拣取、卵母细胞筛选的盲目性以及许多其它的因素，体外胚胎生产的效率仍然很低。本试验经亮甲酚蓝染色后牛 辱目母细胞ⅣM．IVF的影响进行了研究，旨在探索一种较理想的筛选高质量卵母细胞的方法，以满足胚胎工程研究及 生产性胚胎移植的需要，实现良种家畜胚胎的工厂化生产，加速眚牧业的发展。 材料方法 在体视显微镜下选择3层以上颗粒细胞包裹的卵丘卵母细胞复合体直接进行成熟培养作为对照组：将收集到 将BCB的浓度分为13、26、39、52mo忆。 成熟培养22．24h后，用透明植酸酶消化去卵丘细胞。在体视显微镜下观察以排出第一极体的视为成熟，计算成 熟率；以体外受精当天计为第0天，分别在胚胎发育的第2d、7．9d检查卵裂率、囊胚发育率，观察对照组及处理组的 囊胚率。 结果 1不同浓度BCB染色对牛卵母细胞体外成熟的影响 表1不同浓度BCB对牛卵母细胞体外成熟的影响 BCB的浓度卵母细胞分类 BCB+ BCB一 (pM) 卵付细胞 BCB+(％)BcB．(％)培养数 成熟牢(％)培养数 成熟率(％) 26 83 2l 54 27．7(23／83户723(60／83)b 80．9(17尼1) 51．9(28／54)ab 39 76 20 724(55，76)b 490(25，5l产 27．6(2l，76户 52 69 19 9) 42 31．9(22，69尸68．1(47／69)b 73．7(14，l 42．9(18似2)b 注：刷列数值上标不同小写字母表示差异显著(P0．05)，相同字母表示差异／1i显著(P0．05)。以下同。 由表l可见，经BCB染色后，用26，39，52IJM／L的BCB染色后所得到的着色组(BCB+)较13UM／L的BCB染 色组与对照组卵母细胞的成熟率差异不显著(p0．05)。 2B(卫对牛卵母细胞体外受精的影响 表2BCB对牛卵母细胞体外受精的影响 组、BCB一组高，而且存在显著差异(pO．05)。(下转第113页) 118． 中田自牧兽医学会动物繁殖学分会第P四^l；，≯术研讨会论文集 添加肌醇、巯基乙醇与体细胞共培养对牛体外受精后 胚胎发育的影响 跃华，李向臣，自修云，粱素丽，关伟军‘，马月辉‘ 中国农业科学院北京音牧兽医厩lf究所动物遗传资源研究室，北京，l00193 关键词牛，肌醇，巯基乙醇，体细胞共培养，体外受精，胚胎发育 引言 牛体外受精胚胎在8～16细胞期出现发育阻滞现象。目前，克服阻滞现象有助于产生高质量的桑葚胚或囊胚胚 胎，主要采用以下方法：一是与体细胞(卵丘细胞、颗粒细胞)或体细胞液其同培养；二足改进培养液成分，如在培养液中 添加生长因子、营养物质f如丙酮酸和乳酸、牛黄酸和亚牛黄酸等)、不同血清种类等，将有利于胚胎通过体外发育阻 滞。本硪究检测旅加肌醇、巯基乙醇及体细胞共培养对体外受精胚胎培养的影响进行了研究，以期为牛早期胚胎提 供一个良好培养体系。 方法