FISH法分析中国医用X线工作者染色体易位畸.pdfVIP

备提示生物体照射剂量大小的能力。研究揭示出的血清MMP一2含量和活性与丫线辐射之 间存在的量效应关系表明，通过分析某些全身均匀分布蛋白成分和活性的改变来评价生物 受照剂量可行且具有发展新生物剂量指标的潜力。虽然在有些情况下，被分析蛋白的含量 和活性变化与辐射剂量间的量效关系可能并不是预料中的线性递增或递减的方式，可能是 一种具有“阈剂量”性质的“点效应”变化，但这～变化足以说明其指标意义。如果不断发现 不同蛋白含量和活性的变化都与辐射剂量存在一定的“阂值关系，那么同时组合多种蛋 白进行分析，将具有指示不同剂量点的指标连成一个能涵盖较宽检测剂量范围的剂量曲 线，其指标的实用性大大增强。 (参考文献略) 基金项目：国家自然科学基金资助项目 木通讯作者：闵锐(minrui021@hotmail．corn) FISH法分析中国医用X线工作者的染色体易位畸 孙元明 李进王芹唐卫生王知权 (中国医学科学院放射医学研究所天津300192) 以往人们研究职业受照者的染色体重排采用常规细胞遗传学方法如G．显带分析组型， 多因费时费力且需要熟练的阅片人员等不能普遍地开展起来。Pinkel等在1986年首先将 FISH(Fluorescentinsitu 特异性的DNA(整条染色体或染色体特异区段)标记成DNA探针，或称探针池，与靶细 胞染色体进行原位杂交，在带有荧光物质的抗体与标记的抗原物质结合，使整条染色体发 出荧光杂交信号。这种方法为人们研究辐射引起的染色体结构重排提供了一个新的手段。 Protocol 我们用FISH法对中国早期医用X线工作者的染色体易位畸变按照PAM(nefor Aberration and IdentificationNomenclature Terminology)分类法进行了分析。 材料和方法 1．实验对象： 医院中从事X线诊断人员，男性，平均放射工龄为32．7年(22—44年)。对照人员为 医院中没有从事放射性工作医务人员，其它条件同实验对象。 2．常规制备人外周血淋巴细胞染色体标本： 按本实验室的常规方法【1】。 3．荧光原位杂交程序【2】简述如下： 75 X 中1．5—2小时退火。有中期细胞染色体的载玻片在已放入37℃水浴的2SSC中老化30分 变性。将上述探针加在在载片上，加盖玻片，封口，37。C过夜杂交。洗片先经43℃50％甲 XSSC 酰胺／2×SSC15分钟，60℃O．1 15分钟和常温下PN缓冲液。荧光信号放大用抗地 高辛带荧光的一抗、二抗和带荧光的三抗进行连接和放大。复染用抗退色液和碘化吡啶各 10微升。 4．FISH结果检测和Giemsa复看： 荧光显微镜含有允许特定波长的光波通过滤片，荧光物质(异硫氰基荧光素F11rC，碘 色体的荧光为绿色，非靶染色体为红色。在盖玻片范围(22X22mm)全视野的中期进行 观察。去掉盖玻片，带荧光物质淬灭后，用Giemsa染色，根据坐标查找异常染色体，确 定染色体的畸变类型。 5．染色体畸变的识别标准【z】： 荧光，然后用PI来复核。正常中期中有两对绿色荧光染色体，根据其大小和着丝粒的位 为完全易位，不完全易位或插入，均计为一次畸变；双色染色体有两个着丝粒者，记为双 着丝粒；双色或只带绿色荧光无着丝粒，是无着丝粒断片；如伴有易位或双着丝粒者，只 记易位或双着丝粒，无着丝粒断片不单独计数。 6．记录： 按PAINT系统记录【3】。在标有各种畸变的英文字母旁有一括号，括号内英文字母用来 说明与着丝粒的相对位置染色体的着染情况。字母A和a代表没有复染部分，有着丝粒用 A，无着丝粒用a。字母代表B和b染色体有彩涂部分，有着丝粒用B，表示无着丝粒用 b表示。 7．显微摄影： Ektachrome400EPL彩色反转卷照相记录。 结果 用错和7#全染色体探针和荧光原位杂交技术，