实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立、病理特征和中药干预.pdfVIP

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立、病理特征及中药干预 尹琳琳 林丽莉 李林* （首都医科大学宣武医院药物研究室，神经变性病教育部重点实验室，北京 100053 ） 【摘要】目的建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE ）大鼠模型，观察其组织病理特征。以Lewis 大鼠EAE 模型为多发性硬化模型，来研究中药有效成分YH 对该疾病模型髓鞘的保护作用 及其机制。方法 采用豚鼠全脊髓匀浆制备抗原免疫Lewis 大鼠建立EAE 模型。 每天监测动物体重和行为学变化。应用HE 染色观察脑和脊髓炎性浸润、血管袖 套等变化，LFB 染色观察脊髓脱髓鞘变化，电子显微镜观察脊髓髓鞘超微结构。 并研究中药有效成分YH 对EAE 大鼠炎性脱髓鞘的干预作用。结果 （1）随着 病程进展，EAE 模型组大鼠体重明显下降；从第8 天起出现行为学异常，神经 功能损伤评分逐渐增高，于第12 天达峰值。病理形态学检查显示，EAE 模型组 大鼠脑组织血管周围和脑实质有大量炎性细胞浸润；脊髓腰膨大脊膜出现炎性水 肿，并有炎症细胞浸润；脊髓血管周围有大量炎性细胞密集环绕，呈“袖套样” 改变；脊髓髓鞘大面积脱失，且髓鞘板层松散。（2 ）YH 灌胃给药能显著增加EAE 模型大鼠的体重，延迟发病进程，缓解发病症状。（3 ）YH 能减轻EAE 模型大 鼠脊髓腰膨大和脑实质炎性浸润和髓鞘脱失的病理变化，保护神经元、少突胶质 细胞的正常结构，抑制模型大鼠星形胶质细胞的异常活化。（4 ）EAE 模型大鼠 脑和脊髓中炎性因子TNF-α和IL-1β含量明显升高，YH 能显著减少TNF-α和 IL-1β含量。（5 ）EAE 模型大鼠NF-κB 的抑制蛋白IκBα含量降低，间接反映该 模型中NF-κB 活性增高；YH 能增加IκBα含量，提示可能减少NF-κB 的活化。 （6 ）EAE 模型大鼠脊髓腰膨大中神经生长因子（NGF ）和脑源性神经生长因子 （BDNF ）表达降低；YH 能增加NGF 和BDNF 的含量，提示可能促进髓鞘的再 生和修复。结论 采用该模型作为急性MS 的研究模型较为理想。中药有效成分 YH 能改善EAE 大鼠模型炎性脱髓鞘变化，减轻神经细胞结构损伤，从而能改 善其临床症状。YH 保护髓鞘的作用机制主要包括：降低神经炎性反应，减少氧 化应激反应，从而减少对髓鞘的直接损伤；并且通过改善中枢神经系统微环境促 进髓鞘的再生修复。 【关键词】多发性硬化；实验性自身免疫性脑脊髓炎；脱髓鞘；Lewis大鼠；神 经炎症；氧化应激；神经营养因子 * 通讯作者: 李林，女，研究员，研究方向为神经药理学, 中药药理学；Tel: 010 E-mail: linli97@ 多发性硬化(multiple sclerosis，MS)于1868 年由法国医生Charcot 首次提出， 至今仍是整个医学界未解的难题之一。该病是一种慢性、自身免疫性疾病，通过 破坏脑、脊髓以及视神经的神经纤维保护层髓磷脂，影响正常的神经传递而导致 身体残疾。由于该病具有极高的复发率和致残率、呈慢性病程和倾向于年轻人罹 患，而成为最常见、最重要的神经系统疾病之一。 MS 患者在经历反复发作后，残疾往往逐渐加重，许多患者最终只能依靠轮 椅行动或者导致失明。据不完全统计，有近50%的MS 患者在患病15 年后将依 靠轮椅生活，也有约50%的患者出现抑郁症状，自杀率是正常人群的7.5 倍。全 世界目前大约有250 万左右MS 患者，因为症状轻微的患者难以诊断或不愿意寻 求医疗，据估计实际的患者数量会达到500 万，预计在今后4 年中将会增长30% 。 由于该病的发病高峰在30 岁左右，严重危害青壮年人口的生产力和生活质量， 同时也给国家和政府造成极大负担，制约社会和经济发展。 实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, [1-3] 。EAE 模型是典型的针对髓鞘 EAE ）模型广泛地被用于研究人类多发性硬化 抗原特异性 T 细胞介导的免疫反应，啮齿类动物是最常用的动物。由于 Lewis 大鼠模型敏感性高，使用小剂量抗原即可诱发出 EAE ，故本研究采用豚鼠脊髓 作为抗原建立Lewi