改进方法研究中药对产ESBLs大肠杆菌耐药影响.pdfVIP

中国畜牧兽医学会中兽医学会第八次全国代表大会暨2014年学术年会论文集 353 学，2009，46(3)：506—509． [15]胡秋辉，杨方美，潘根兴，等．喷施硒对大豆品质和大豆食品硒水平的影响[J]．中国油料作物学 报，2001，23(3)：42—45． [16]张艳玲，潘根兴，胡秋辉，等．叶面喷施硒肥对低硒土壤中大豆不同蛋白组成及其硒分布的影响 [J]．南京农业大学学报，2003，26(1)：37-40． [17]彭克勤，洪亚辉，夏玮．硒对早稻光合作用和产量性状的影响[J]．湖南农业大学学 报，1997，23(5)：432—434． [18]王晋民，谭大风，王艳萍，等．外源硒对胡萝b生理生化特性、富硒性及其产量的影响[J]．青海师 范大学学报(自然科学版)，2007(2)：70—73． [19]周大寨，唐巧玉，张驰，等．硒对花椰菜幼苗叶绿素、脯氨酸及丙二醛含量的影响[J]。湖北农业科 学，2005(2)：77—78． 改进方法研究中药对产ESBLs大肠杆菌耐药的影响 司红彬，夏娟，宋剑武，郑艳青 (广西大学，广西，南宁，530005：) 摘要：研究中药海珠草对产超广谱B一内酰胺酶(ESBLs)大肠秆菌的耐药性影响，采用二倍稀释法与中药 传代结合的方法测定产ESBLs大肠杆菌对抗生素的MIC变化。结果表明，中药海珠草可以显著降低产ESBLs大肠 杆菌对阿莫西林、加替沙星、诺氟沙星、盐酸左旋氧氟沙星、乙酰甲喹、磺胺间甲氧嘧啶钠、克林沙星、氟苯尼 考的MIC值，MIC均降低4倍以上。采用该法可较好的研究中药对产ESBLs大肠杆菌的耐药性影响。 关键词：中药；大肠杆菌；耐药逆转 近些年，随着畜牧养殖集约化程度的提高，动物疾病暴发的频率和复杂性也越来越高。随之而 来的是由于抗菌药物的大量应用所造成的细菌耐药性问题越来越严重，尤其一些人畜共患病的病原 如链球菌、大肠杆菌等产生了严重的耐药性。最近，英、印科学家在印度地区发现了一种“超级细 菌”一含有一种名为新德里金属一B一内酰胺分解酶(NDM-1)的大肠杆菌，除多粘菌素外，该菌几 乎对目前所有的抗生素均耐药n1。当前世界形势下，抗生素的研发速度放缓，其研发速度远赶不上 细菌耐药性产生的速度，而且我国的细菌耐药性问题尤为突出。我国院内抗生素的使用超过60％， 传统青霉素和链霉素几乎绝迹，取而代之的是二代、三代甚至四代头孢幢。。因此，找到一种可以延 缓耐药性的产生或逆转病原菌耐药性的物质变得尤为紧迫和重要。我国中草药资源丰富，许多中草 药已经被证实具有抗菌作用，并被广泛使用b3。中草药以成本低廉、效果持久、毒副作用小、不易 产生耐药性等特点日益受到人们的青睐，尤其是以中药抑制细菌耐药性也成为国际热点之一H。。中 药的逆转耐药性已经作为中药抗菌研究的一个新的领域已经取得了不少成就‘5。。关于对耐药菌具有 逆转作用的中药筛选研究方法主要采用影印药理学方法筛选出具有逆转作用的中药然后分析其作 用机制哺。71。这种方法成功的前提是中药作用细菌后，必须保证被作用后的细菌还能继续存活才能 354 中国畜牧兽医学会中兽医学分会第八次全国代表大会暨2014年学术年会论文集 被培养成功再进行下一步耐药消除的验证实验。由于中药成分复杂，可以多靶位地作用于细菌，影 响细菌不同阶段的生长，进而影响细菌不同的部位和不同的繁殖生长代谢环节，因此不是所有中药 作用细菌消除耐药性后仍能保证细菌生长。故采用上述方法筛选耐药逆转作用的中药有较多局限， 本文采用改进的筛选逆转作用的中药方法研究中药海珠草对产ESBLs大肠杆菌的耐药逆转效果。 1材料和方法 1．1主要实验材料 受试菌株临床分离的猪源E．coli，本实验室临床分离鉴定并PCR扩增测序确定含有ESBLs 亚型为TEM-1和CTX-M一14并保存；海珠草(广西瑶药)、加替沙星(台州外高桥联通药业有限公司， 含量99．5％，批号061022)、阿莫西林、诺氟沙星、盐酸左旋氧氟沙星、痢菌净、磺胺间甲氧嘧啶 钠、克林沙星、氟苯尼考等均为国产药，使用时均在有效期内。海珠草提取物，取海珠草509，分 当于生药lg。 1．2菌种复活及培养 Il lnLLB肉汤中，37℃培养18～24h，接种于LB琼脂平 将各保存菌液50L分别接种于5 板，37℃过夜培养。次日，分别挑取平板上1～2个典