噬菌体肽库及其在抗原表位识别中的应用.pdfVIP

第2l卷第6期 中 国 兽 医 学 报 Vol-2l，No．6 o of science Nov． 2OO 2 O1年l1 月 ChineseJournalVelerinary l 噬菌体肽库及其在抗原表位识别中的应用 刘文博 (扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室．江苏扬州225009) 关t词：噬菌体肽库；抗原表位；丝状噬菌体}生物学特性 中围分类号：s85265；Q78 文献标识码：A 文章编号：l005—4545(2001)06一0637一03 肽库(p印tide1．brary)是近年来发展起来的一种新技术。出目的克隆，然后通过侵染宿主苗进行扩增，进行几轮淘筛而 它是某一长度(如5肽或6肽)短肚的大量集合，包含了该长使目的克隆得到富集，有利于筛选出结合力较强的目的克 度短肚的各种可能序列或其中的绝大部分。“肚库”概念提出 隆Ⅲ。因此，现在所用的噬菌体肚库多为丝状噬菌俸载体展示 的理论基础是Ge弘sen等Ⅲ的z个观点：(¨含有关键氨基酸败库。 残基的短肚能够模拟蛋白质上的表位；(2)多数情况下．几个 关键残基与它的结合分子之间形成的非共价键构成了全部结 1 丝状噬菌体的生物学特性 合能的绝大部分，即蛋白质之间的相互作用或识别是通过局 丝状噬菌体是一群侵染革兰氏阴性菌并特异性吸附于其 部肚段问的相互作用来实现的。20世纪80年代初，Geys5en 性菌毛上的相关性很高的病毒，包括M13、似、n等．属于丝状 提出了模拟表位的概念．他认为1个抗原决定簇，即1个表 位，只由几个氨基酸组成，并且可以用化学合成法合成这个表 亲缘关系十分密切．特征相似，为细长线状的颗粒．投有头和 位，即模拟表位．随后，他用化学合成法合成了一系列短肽(即 尾钉等．其衣壳内包古有1个单链环状DNA分子．基因组共 肚库)，从中筛选出模拟表位，并证实其确实能够和原来的蛋 有lo个结构基因．编码10种蛋白质““． 白质发生竞争抑制作用．化学台成法具有以下优点口叫]：(1) 丝状噬菌体的生活周期；侵染宿主细胞时，位于丝状噬菌 可古非天然氨基酸；(2)可用于所有实验室的液相条件；(3)有 体尾端基因_的产物蛋白(Ep3)识别并吸附在大肠杆菌性菌 的无需铡序．但由于其合成成本太高，无击合成较长的多肚 毛的末端，然后其主要衣壳蛋白脱落，DNA被注人宿主细胞 (大于20个氨基酸)，不能扩增和重复使用等缺点．使得另一 内。进入细胞内的噬菌体DNA为正链，并以此为模板复制出 种肽库技术倍受青睐，这就是噬菌体展示肽库。 formDNA．RF 负链．形成双链复制型DNA(replicative 1988年．Parmly等“1杓建了fd噬菌体衍生物fUsE系列 DNA)。DNA先进行几轮0复制，然后进行蒗环复制。攘环复 载体．以便于外源片段的插入．1990年Scott等“、Devlin DNA的正链特