应用PCR法检测微生物类农药木霉菌可湿性粉剂急性经口致病性.pdfVIP

应用PCR法检测微生物类农药木霉菌可湿性粉剂急性经口致病性 张静姝1刘英华 姜淑卿 何宁 天津市疾病预防控制中心，天津300011 目的 应用PCR法检测微生物类农药木霉菌可湿性粉剂急性经口致病性，探讨PCR法 在微生物类农药经口致病性研究中的应用。方法 选用微生物农药木霉菌可湿性粉剂为受 试样品，试验动物染毒组按108个孢子/只灌胃，对照组不做任何处理。记录观察期内动物的 中毒症状、死亡情况、体重，对死亡动物进行大体解剖并进行病理组织学检查。于染毒后第 1、7、14、21天收集动物粪便，同时剖解动物的肾脏、心脏和肝脏等组织提取DNA，利用 木霉菌特异性引物进行PCR扩增，并进行琼脂糖凝胶电泳观察受试物目的基因的表达，以 观察受试微生物农药的感染性、持久性，以判断其致病性。 结果 动物染毒后，未见明显 中毒表现，观察期内无死亡，大体检查及病理检查均未见明显异常。染毒后第1天染毒大鼠 粪便提取DNA，经PCR扩增琼脂糖凝胶电泳后可见目的基因扩增条带，其余各脏器提取 DNA，经PCR扩增后均未见目的基因表达，表明仅粪便中含木霉菌，染毒后7天粪便中目 的基因未见表达，表明粪便中木霉菌被清除至检测水平之下。受试物口服进入动物体内后发 现仅在胃肠道内存在，并逐渐被清除掉，并未透过受试动物的胃和肠道而侵染进入动物的组 织、器官中，提示受试物经口染毒后对大鼠无致病性。结论 应用本检测方法可有效的检测 出受试物的清除情况，且具有较好的特异性，可做为微生物农药经口毒性/致病性的检测方 法。 微生物农药；急性经口毒性；致病性 Detectionofacuteoralpathogenicofmicrobialpesticide TrichodermaWPbyPCR ZhangJingshuLiuYinghuaJiangShuqingHeNing TianjinCentersforDiseaseControlandPrevention,Tianjin300011,China AbstractObjectiveTodetecttheacuteoraltoxicity/pathogenicityoftrichodermawettable powder.ExploringtheapplicationofPCRmethodinthepathogenicityofmicrobialpesticides MethodsTrichodermaWPwasselectedasthetestsamples.Theanimalsofexposuregroupwere exposedatadoselevelof108sporesperratbygavage.Animalsofcontrolgroupwithoutany treatment.Thepoisoningsymptoms,mortality,bodyweightofanimalswererecorded.Dead animalsweredissectedandhistopathologicalexaminationwereperformed.Atthe1st、 7th、 14th and21stdayafterexposure,stoolswerecollected,thenthoseratsweredissectedandthekidneys, liver,heart,andotherorganswereeviscerated,theDNAofthetissuesampleswereextracted, thenamplifiedwithPCRandidentifiedbyagarosegelelectrophoresis.Todeterminewhetherthe testedcompoundshavepathogenicitytorats.Results Nomortalitywasobservedafter exposure.Inthehistopathologicalexaminationnopathologicalchangeswerefound. Polyacrylamidegelelectrophoresisshowthatonlytheamplificationproductsofstoolsonthe1st dayappearedpositivestr