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化学发光免疫分析法检测肿瘤标志物
韩金利综述康熙雄审校
首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心 100050
【摘要】肿瘤标志物作为诊断肿瘤的一项重要指标,其检测对于肿瘤的普查、辅助诊断、疗效观
察和预后判断具有重要的意义。化学发光免疫分析法是一种灵敏度非常高的分析方法,现已广泛应用
于肿瘤标志物的检测研究中。随着发光试剂与检测仪器的不断进步,化学发光免疫分析法的研究也在
不断深入发展,作为检测肿瘤标志物的一种重要方法,将在肿瘤的早期诊断以及预后的监测中发挥愈
加重要的作用。本文从化学发光体系、检测仪器以及高新技术在该领域的应用及产生的影响三个角度,
综述了化学发光免疫分析法用于肿瘤标志物检测的研究进展,对该领域未来的发展进行了展望。
【关键词】化学发光 免疫分析 肿瘤标志物
肿瘤是一类严重威胁人类生命和健康的恶性疾病,2002年世界卫生组织(WHO)公布全世界每年新
增1000万癌症病例,目前世界上死亡人数中有12%死于癌症。肿瘤标志物Tumormarker,TM)作为一
项重要指标,在肿瘤的早期诊断中发挥着越来越重要的作用。肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程
中,由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细
胞恶变各阶段表型及基因特征性。与正常组织相比,标志物明显增高,并存在于血液、细胞、组织或
体液中”1。大多数情况下体内肿瘤标志物的含量都非常低,一般的检测方法很难对其进行精确的定量。
过去对肿瘤标志物的检测主要用放射免疫分析法,但是存在敏感性不高、操作复杂、测定结果不稳定、
试剂保存时间短、放射性污染、仪器昂贵等缺点。因此,迫切需要发展一种新的检测方法对血液中TM
进行精确的定量分析。化学发光免疫分析法检测正好适应了这种需要。本文从化学发光体系、检测仪
器以及高新技术在该领域的应用及产生的影响三个角度,对化学发光免疫分析法用于肿瘤标志物检测
的研究进展,及对该领域未来的发展趋势进行综述。
1.不同化学发光体系在肿瘤标志物检测中的应用
化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统。根据其标记物的不同可
分为三大类型,即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。
1.1化学发光免疫分析
化学发光免疫分析(Chemiluminescence
原的一类免疫测定方法。用于标记的化学发光试剂应符合以下几个条件:(1)偶联后能保持发光试剂高
的量子效应和反应动力;(2)与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物;(3)对被标记物的理化特性,
尤其是免疫活性影响很小。鲁米诺类和吖啶酯类化学发光试剂是最常用的标记发光试剂。庄惠生等旺1
采用自己设计的一种新的合成吖啶酯的方法,并利用自制的双吖啶发光标识物13110,10I_二甲基一3,3f_
一412—
1.2化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析(ChemiluminescenceEnzyme
行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,根据测定的发光信号进行定量分析。目前,
常用的酶标记物有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),它们有各自的发光底物。HRP常用的
发光底物是鲁米诺及其衍生物,使用HRP标记抗体,进行免疫反应后,利用鲁米诺作为发光底物,在
过氧化物酶和起动发光试齐II(NaOH和H:0:)作用下,鲁米诺发光,发光强度依赖于酶免疫反应物中酶
的浓度。AP和1,2一二氧环乙烷构成的发光体系是目前重要、灵敏的一类化学发光体系。这类体系
APS一5为代表。APS一5作为发光底物具有以下优点1.
类化合物91,以美国Lumingen公司的Lumingen
极高的灵敏度,能够检测到少于10—9摩尔的AP分子;2.在极短时间内发光强度即达到峰值并长时间
保持稳定,因而在何时测量都能得到重复性很高的测定结果。3.宽大的线性范围,在测定高浓度样品
时无需稀释。4.在22—25。(2范围内,发光反应对温度不敏感,因而无需温度控制。
催化H:O:氧化曙红的反应和HRP催化H:0:与发光剂鲁米诺的化学发光反应相耦合,测定血液中AFP的
行了检测。
1.3电化学发光
电化学发光(electmchemiluminescence
程。在电极上施加一定的电压或电流时,电极上发生电化学反应,在电极
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