H3N2亚型犬流感病毒NS1基因原核表达.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集 H3N2亚型犬流感病毒NSl基因的原核表达 师志海，张敦伟，李守军‘ (华南农业大学兽医学院，广东广州510642) 摘 H3分离株的NSl基因， 要：为原核表达犬流感病毒(cry)NSI蛋白，本研究利用特异性引物扩增CW 45 ku。以纯化的重组蛋白作为包被抗原，初步建立了检测CW血清抗体的间接ELISA诊断方法，为今后进一步 开展CW的诊断研究奠定了基础。 关键词：犬流感病毒(cw)；NSI基因；原核表达 犬流感(Canineinfluenza，cD是由犬流感病毒(Ca- 1材料和方法 influenza nine virus，CIⅥ引起的以犬体温升高、咳嗽、 流鼻液、喷嚏、食欲减退、精神沉郁、呼吸困难为特征 1．1 病毒与血清 的呼吸道传染病，犬发病后易混合、继发感染其他病毒 性、细菌性疾病。2004年CrawfordP．C．在美国的佛罗里 大学兽医学院临床兽医系外科教研室分离保存。 达州从犬体内首次分离到马源性甲型H3N8流感病毒【I】， 而后泰国也报道同年有犬死于高致病性H5N1禽流感病 毒回。2007年，在韩国报道了禽源性H3N2亚型流感病 毒感染犬的病例囹。2006年本实验室在我国华南地区分公司。 离到了CW。预示犬将成为流感的一种新的宿主，经进 1．3主要试剂TRIzolLS DNA Reagent、ExTaq —步的动物实验证实幼龄、纯种犬对H3N2亚型犬流感 聚合酶、T4DNA连接酶、反转录酶、BamHI、 病毒易感，临床症状明显；成年、当地土种犬不易感染 Xho I、DNA 或呈隐性感染，并且普遍呈现低死亡率的特点。 量抽提试剂盒购自OMEGA公司；胶回收小量试剂 CW属于正粘病毒科流感病毒属，病毒基因组 盒购自上海华舜生物技术有限公司；预染蛋白 为分节段单股负链RNA，编码至少10种病毒蛋白。 由于NSl蛋白其结构保守，可以刺激机体产生相应 的抗体，而且只存在病毒感染的细胞中，在病毒粒 底物显色试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公 子内并不存在。灭活疫苗免疫的动物不会产生针对 Bind 司；His Pmhfication Kit为Novagen公司产品。 非结构蛋白的抗体，而野毒感染动物却会产生，以 1，4 HAl基因的扩增 NSl蛋白为抗原建立ELISA方法对鉴别诊断流感病 1．4．1 引物的设计 根据本实验室对分离毒株 毒灭活疫苗免疫动物和自然感染动物有很重要的应 CGZl NSl全长的测序结果及对表达载体pET．32a 用价值t41。 科学基金重点项目(8251064201000008)；教育部博士点基金(20094404110017) 作者简介：师志海(1982-)，男，河南新乡人，博士研究生，主要从事临床疾病和分子生物学研究． 张敦伟(1984．)，男，河南信阳人，硕士研究生，主要从事流感分子生物学研究． 。通信作者：E．mail：shou