牛胚胎体外培养体系的优化.pdfVIP

维普资讯 第 34卷 第 6期 西北农林科技大学学报(自然科学版) VoI_34 NO．6 2006年 6月 Jour．ofNorthwestSci—TechUniv．ofAgri．andFor．(Nat．Sci．Ed．) Jun．2006 牛胚胎体外培养体系的优化 张志平’，张君涛 ，安志兴 ，张 锈 ，张 涌 (1西北农林科技大学 生物工程研究所 。陕西 杨凌 712100； 2河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 450002) [摘 要] 将体外受精后 的牛卵母细胞随机分组进行培养 ，比较 了胎牛血清 (FBS)和发情后 7d牛血清 (E7BS)、不同培养液 (CR1+3mg／mIBSA、s()F+3mg／mIBSA和s()F+0．1mg／mLPVA)、共培养体系和不同 培养液体积 (0．1，0．5和2．0mL)对胚胎发育的影响，优化了牛胚胎体外培养体系，并对该体系的稳定性进行了检 验。结果表明，优化后的牛胚胎培养体系为：前 48h用CR1+3mg／mLBSA培养液，48h后用CR1+体积分数 lo E7BS培养液培养 120h，培养液体积为0．5mI，并且采用共培养。受精后颗粒细胞保留48h。用该培养体系培 养的牛胚胎发育良好，平均囊胚率为44．9 ，表明该优化培养体系较稳定。 [关键词] 牛；体外受精；胚胎培养；囊胚；m清 [中图分类号] $823．34；Q813．7 [文献标识码] A [文章编号] 1671—9387(2006)06—0007—04 近年来 ，虽然动物胚胎工程研究取得了长足进 波激素厂生产；牛发情后 7d的血清 (ETBS)由本实 展 ，试管动物、克隆动物等相继 降生 ，但是成功率极 验室 自制 (56C灭活 3Omin)。 低…，其原因主要是体外胚胎发育能力差，移植后妊 1．2 牛卵母细胞的收集与成熟 娠率降低。另外 ，早期胚胎的体外培养是体外受精 、 抽吸法收集牛卵巢表面直径为5～8mm 的卵泡， 动物克隆、转基因等生物技术的一个关键环节 ，许多 在体视显微镜下收集卵母细胞，将细胞质均一且有 3 物种体外培养的胚胎均可发育到囊胚阶段，但囊胚 层以上完整卵丘细胞包裹的卵母细胞置于成熟液中， 率偏低、质量较差 ，主要原因是胚胎体外培养体系不 成熟培养 24h(卵母细胞成熟液为TCM一199+体积 完善 。总之到 目前为止，胚胎的体外培养体系还不能 分数 10 FBS+10~／g／mLFSH+1tLg／mIE2，使 完全模拟母畜生殖道内的环境 ，且不稳定 j。因此， 用前预平衡 2h)。 建立一个简单、稳定的胚胎发育培养体系势在必行。 1．3 牛卵母细胞的体外受精 本试验采用不同的培养体系对牛体外受精胚胎进行 牛冻精于37C水浴解冻后缓缓注入盛有4mL 了体外培养，研究不 同培养条件下胚胎 的体外发育 预平衡 2h以上精子获能液 (BO)的试管底部，上浮 能力 ，优化了牛胚胎体外培养体系。现将研究结果报 获能 1h，将获能后的精子加入到 50 L含有 BO液 道如下。 的受精微滴中，调整精子终浓度为 1×10／mL，精子 与卵子共孵育 24h后移人培养液 中进行体外培养。 1 材料与方法 BO液为 pH 7．8的平衡盐溶液 ]，内含 30vg／mL 1．1 材 料 肝素和 6mg／mLBSA。 1．1．1 牛卵巢 牛卵巢采集于西安市屠宰场 ，置于 1．4 牛胚胎体外培养体系的优化 25～30C无菌生理盐水 中，4h内运 回实验室。